以染色体步移方法获得早实枳及普通枳LFY基因上游2kb序列,生物信息学分析表明其具有典型的启动子结构,并含有昼夜节律光感应元件和赤霉素等顺式表达调控元件,早实枳与普通枳LFY启动子有碱基序列差异,但不存在于已知的调控元件中;根据已知的调控元件构建了缺失表达载体,转模式植物拟南芥进行了启动子活性定性、定量分析。结果表明木本植物LFY启动子在草本植物中可以在播种后7天开始表达,无须经历长的诱导时期;试验研究确定了启动子的核心部位在转录起始位点附近,且受GA3诱导增强表达。对启动子及LFY全基因生物信息学分析发现,LFY存在典型的甲基化岛结构,且位于启动子并延伸到第一外显子这一重要的表达调控区域;去甲基化实验处理可促使LFY基因表达量显著上调,表明甲基化/去甲基化对LFY表达有调控作用;以重亚硫酸盐修饰测序定点分析胞嘧啶甲基化状况,结果发现,LFY基因在理论上的甲基化岛区域比其他非甲基化岛区域甲基化程度有显著差别,且童期阶段甲基化程度较高,随着阶段发育进程,该区域发生去甲基化作用,表明去甲基化是木本植物阶段发育基因表达调控的一种重要方式,该发现对揭示木本植物阶段发育调控分子机理有重要意义。
英文主题词phase development;LFY;promotor;DNA methylation;