中文摘要：

糖尿病是现代疾病中仅次于癌症，危害人类健康的第二杀手。中药在发病机制复杂的糖尿病治疗方面有着悠久的应用历史。本项目以已获得国家食品药品监督管理局临床批件的（批件号2010L00278）用于改善胰岛素抵抗（IR）的临床验方"三叶糖脂清"为研究对象，通过UHPLC-TOF/MS技术将总方及各组成药材的化学指纹图谱与药物干预后IR动物模型的血清、组织指纹图谱相比对，确定三叶糖脂清方中可移行体内物质，基于网络药理学分析确定与IR密切相关的作用靶点，结合计算机虚拟筛选，采用分子对接、构效关系、分子类药性、多样性、虚拟筛选等方法进行计算机辅助活性筛选，初步确定改善IR活性成分。通过体外多种胰岛素抵抗细胞模型确定活性成分，再通过遗传型2型糖尿病实验动物体内试验验证三叶糖脂清方改善IR作用机制及作用靶标，从"多成分、多靶点整合作用"角度阐明三叶糖脂清方的药效物质及作用机制。

结论摘要：

采用系统化学成分研究方法确定三叶糖脂清各组分的化学成分，对不同组分分别给予大鼠口服给药，测定血液及各胰岛素抵抗相关脏器中主要化学成分及药代动力学参数，采用分子对接方法评价体内蓄积主要成分对胰岛素抵抗相关靶标的影响，通过MM2力场进行初步能量优化，寻找最小能量构象。选择胰岛素抵抗作用机制研究适宜细胞、整体动物研究模型，研究三叶糖脂清及各组分改善胰岛素抵抗的作用机制，KK-Ay小鼠口服给药糖脂清4周后，采用PCR及Western印迹法来研究其对肝脏和肌肉中AMPK、PI3K/AKT信号通路的影响。采用油酸钠诱导HepG2细胞模型，测定糖脂清全方及各组分组对HepG2细胞脂肪蓄积的抑制作用。糖脂清全方及各组分组作用细胞48 h后，运用RT-PCR技术检测HepG2细胞中IRS-1、IRS-2、AKT、GluT4基因表达情况，运用Western印迹法检测HepG2细胞中AKT及p-AKT蛋白的表达。采用胰岛素刺激已分化的L-6细胞，糖脂清全方及各组分组作用细胞24 h后，用25 mM的葡萄糖孵育10 min，检测细胞中IRS-1、IRS-2、AKT、GluT4基因表达情况，AKT及p-AKT蛋白的表达。明确了三叶糖脂清方各组分的主要化学成分、入血成分及靶器官蓄积成分，\分析了各成分对胰岛素抵抗相关靶蛋白的作用，进一步研究了三叶糖脂清方及其组分体内外作用机制，\在KK-Ay小鼠的肝脏中糖脂清高中低各组PI3K， AKT和其磷酸化蛋白水平无显著差异。在肌肉中，糖脂清复方各组PI3K，AKT，GYS 及各自磷酸化蛋白水平以及组织GluT4蛋白均增加。在HepG2细胞中，糖脂清复方中IRS- 2基因上调约10倍，对AKT，IRS-1和GluT4基因表达无显著影响。在L-6细胞中， 糖脂清复方及各组分显著增加IRS-1和AKT的mRNA水平。三叶糖脂清方可上调肝脏、肌肉、脂肪细胞中AMPK表达。下调ACC、FAS、SREBP-1c、HSL在肝脏、肌肉、脂肪细胞中表达，下调TNF-α在肝脏肌肉中表达、PPAR-α在脂肪细胞中表达。其中ACC失活促进线粒体脂肪氧化。抑制FAS活性，减少甘油三酯的合成。下调PPAR-α可以抑制SREBP-1c表达，而下调的SREBP-1c直接抑制FAS的活性，同时能促进GLUT-4的表达。抑制HSL促进脂肪酸氧化，改善胰岛素抵抗。