于百合呼吸跃变期提取总RNA,纯化mRNA;据已发表的植物1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase, ACC合成酶)基因的保守序列,设计合成特异引物,通过反转录PCR获得特异cDNA片段,连接pGEM-T Easy载体,克隆、测序并与GenBank中已有的ACC合成酶基因cDNA及氨基酸序列进行比较分析,确定ACC合成酶基因功能,登录GenBank;构建ACC合成酶反义基因表达载体;采用农杆菌介导法,将ACC合成酶反义基因导入百合栽培品种中去,并采用PCR、Southern blot及Northern blot进行分子鉴定;通过田间测定乙烯和开花期观测,最终获得延长开花期的百合新品系2-3个。
百合花是世界主要的名贵鲜切花之一,全世界每年销量数以亿计,我国是百合原产地之一,切花生产面积与产量发展迅速。百合是一种乙烯释放跃变型花卉,花开放时乙烯大量释放,特别是采摘运输中机械损伤,可加速花朵乙烯释放高峰的到来,从而使花朵迅速衰老。通过克隆百合ACC氧化酶基因,构建了ACC氧化酶反义载体及RNA干扰载体,并转化百合,是从根本上解决这一难题的有效途径。研究结果我们已成功的从东方百合“索邦”、亚洲百合“普利安娜”中克隆了ACC氧化酶基因片段,并登陆GenBank(登录号分别为AY656735,AY656736,DQ062133和 DQ062134);构建了ACC氧化酶反义载体和RNAi载体;完成了农杆菌介导的反义ACC氧化酶基因表达载体及RNAi载体对百合的遗传转化,并获得3个百合品种转基因株系;本项目发表了相关论文6篇,在Hortscince发表摘要1篇;培养研究生4名。