中文摘要：

阐明肝再生机制、调控肝再生进程对治疗肝创伤意义重大。肝细胞内脂肪滴的形成可以促进肝再生，但作用机理未知。最近体外研究提示脂肪滴蛋白质组在细胞代谢、生长中具有重要作用。因此，本课题拟在我们前期良好的肝脏蛋白质表达谱的工作基础上，采用亚细胞器比较蛋白质组学策略进一步研究肝再生中脂肪滴蛋白质组的差异表达谱，挖掘促进肝再生的功能分子，从一个全新的角度探讨肝再生的分子机理。应用70%肝切除大鼠为模型，以假手术组为对照，提取不同时程肝组织的脂肪滴蛋白质组分；iTRAQ技术差异标记酶解后的肽段，用二维液相色谱分离、串联质谱鉴定，数据检索获得蛋白列表，蛋白定量分析，建立肝再生中脂肪滴蛋白质组的动态差异谱图；鉴定差异分子，以细胞分子生物学和动物学实验验证，明确关键分子调控肝再生的功能，拓展脂肪滴蛋白质组的新成员、新功能，进一步明释肝再生的分子机制，增添肝再生的有效调控靶点，为治疗肝创伤提供新思路、新途径。

结论摘要：

脂滴（Lipid Droplets）不仅是调控脂质代谢的重要细胞器，还能与其它细胞器相互作用，进行分子转运、信号交流，辅助细胞应对特定的环境变化，而执行这些功能的关键基础在于其蛋白质组分的变化。研究显示在肝再生过程中，肝脏细胞内会形成大量的脂滴，与肝再生进程密切关联，但其功能机理尚不明确，本项目应用比较蛋白质组学策略对此展开探索。 以2/3肝切除的大鼠作为肝再生模型，分离、纯化不同时间点再生肝组织的脂滴，提取其蛋白质组分，用胰酶水解为肽段，经八标iTRAQ（8-plex Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）剂标记后用二维液相色谱结合串联质谱鉴定出蛋白质组分，再进行定量分析，构建出蛋白质差异谱，从中发现重要的差异分子，采用分子细胞生物学方法对其进行验证。 经过质谱鉴定，我们以正常大鼠和假手术大鼠的肝组织为参照，全面分析了大鼠肝再生早期（6h，12h）、中期（24h，48h）和晚期（72h，120h）肝脏细胞内脂滴蛋白质组的动态差异，发现其与肝再生进程紧密相关在肝再生早期6h和12h，脂滴蛋白的表达模式相似；术后24h，脂滴蛋白的表达模式最为特异，较多蛋白在此时表达上调；而肝再生中后期48h、72h和120h的脂滴蛋白表达模式依次接近，其中肝再生后期120h与假手术组最为接近。本研究共鉴定到223个蛋白，与以往的脂滴蛋白质组的研究结果相比较，我们在大鼠肝脏脂滴中新发现了156个基因的表达产物，为进一步探索脂滴蛋白质组在肝再生中的作用铺垫了良好的基础。 通过定量分析，找到29种具有显著差异表达的蛋白质，对关键候选蛋白进行了Western Blot和细胞定位验证。GO系统的分子功能注释和KEGG通路数据的分析，提示我们所发现的脂滴蛋白质组可能通过多种途径参与大鼠肝再生的调节1）参与细胞应激，调节胞内氧化水平；2）储存脂类，降低脂质过量产生的细胞毒性；3）保持脂质代谢平衡，供给细胞增殖所需能量和生物膜合成底物；4）募集和转运蛋白因子，与其它细胞器相互交流；5）暂存胞内大量合成的蛋白，收容异常蛋白辅助降解，维持细胞内环境平衡等。