中文摘要：

脐血是干细胞高效而廉价的资源库。小双链RNA(siRNA)是近年发现的基因转录后水平抑制因子，体外合成的siRNA具有细胞内天然物同等的活性，在基因治疗研究应用中将以多方优势取代反义寡聚核苷酸。本项目拟建立脐血诱导肝干细胞、祖细胞的体外实验体系，以插入了siRNA p27的逆转录病毒启动子为载体，将siRNAp27感染至培养的细胞中，使之有效扩增。通过连续检测肝和胆管细胞特异性产物-白蛋白和细胞角质蛋白的产生，判断肝细胞的成熟过程与功能活性，通过检测细胞增殖蛋白或DNA合成判断siRNAp27的作用。进一步，将体外扩增的肝祖细胞移植至2-AAF诱导损伤并行部分肝切除的NOD/SCID鼠肝脏，定期检测血清及肝组织中白蛋白、CKs等的产生了解肝细胞移植后在肝内的生长、分化情况，形态学观察和X染色体检测确定移植成功与否和移植细胞在肝内的分布，并长期观察动物存活期和致瘤性，为临床肝细胞移植奠定基础

结论摘要：

背景:作为干细胞来源脐血具有易获得、对供者无损伤、干细胞丰富且增殖和分化潜能更高的特点。我国是肝病大国，肝干/祖细胞移植是救治晚期肝病、替代肝功能、辅助重肝患者争取肝移植等的有效方法。利用siRNA干扰细胞周期调控因子p27表达，经体外诱导以获得大量脐血源肝干/祖细胞。方向通过SCID鼠肝内移植，确定肝损伤修复和肝再生能力，为临床应用提供实验依据。内容分离脐血单个核细胞经生长因子培养，含siRNAp27-GFP的腺病毒感染后，检测胚胎和成熟肝细胞、肝功能和胆管细胞标志物mRNA和蛋白质表达；2-AAF损伤后1/3肝切除SCID鼠经损伤处注射上述细胞，检测静脉血和肝脏AFP，ALB,CK-18,CK-19表达，病理学观察肝脏修复和再生，并与空载体感染组比较。结果及科学意义脐血能诱导础肝祖/干细胞，与对照比siRNA p27能促进培养细胞增殖，移植后能够修复肝损伤并能使肝脏再生。体内外检测mRNA和蛋白表达,p27减低，CDK2、AFP于早期，ALB和CK19于稍晚期均增加。鼠外周血细胞表达人CD45。为利用脐血获得足够有功能活性的肝干/祖细胞，救治肝病患者提供了依据，奠定了实验基础