中文摘要：

柯氏棒状杆菌（CK）是人体的一种正常寄生菌，迄今未被证实有具体致病性物质。我们及国外的研究均发现,CK与肉芽肿性乳腺炎（GM）的发病密切相关,但机制不清。与此同时，痤疮丙酸杆菌（PA）相关的研究表明，PA可通过介导机体免疫失衡引发结节样肉芽肿等疾病。考虑到CK与PA的生物学特性极为相似，我们推测CK通过引起机体免疫失衡导致GM发生。前期研究工作已发现CK可活化树突状细胞（DC），上调IL-6和IL-12的分泌，表现为有利于Th1、Th17细胞分化的格局。本课题（1）通过体外细胞共培养体系，研究CK刺激的DC对Th细胞亚群的诱导分化作用及机制；（2）建立CK诱导的BALB/c小鼠肉芽肿模型，探讨Th细胞亚群在炎症局部的实际分布，相互间作用及与组织中CK菌量、组织病理损伤的关系。以期揭示CK诱导Th细胞亚群分化的机制及其在GM发生中的作用，为疾病的诊疗提供理论和实验依据。

结论摘要：

人类肉芽肿性乳腺炎(granulomatous mastitis, GM)是一种良性乳腺疾病，但因其病因不清且表征与乳腺肿瘤相近，临床治疗多以手术切除为主。有报道称，可从GM病损局部分离得到柯氏棒状杆菌（Corynebacterium Kroppenstedtii,CK）或其它少数与之相似的需脂性棒状菌。本课题即以CK为对象，研究其免疫刺激功能，进而揭示其在GM发病机制中的作用，以期帮助临床探寻针对GM的非创伤性诊疗方法。首先，课题组通过培养鉴定获得目的菌CK以及新菌种，产丙酮酸棒状杆菌（Corynebacterium pyruviciproducens, CP）。我们研究了CP对树突状细胞及巨噬细胞的免疫刺激作用，发现其可诱导Th2极化，具有明显促体液免疫功能，从而确立CP为本研究对照菌。随后，建立多个体外共培养体系【①CK/CP与小鼠骨髓源树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cell, BMDC）；②CK/CP，BMDC和CD4+T细胞】，利用流式细胞术(flow cytometry, FCM)，实时定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR），以及酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)进行检测。在共培养体系①中，FCM检测显示，较之经CP菌刺激的BMDC，CK组BMDC表面显著高表达MHCⅡ及CD40分子；qRT-PCR和ELISA亦发现，CK刺激后的BMDC，其IL-23/IL-6/TGF-β的mRNA表达水平以及该体系上清中上述因子加之IL-12的蛋白量均显著上升。在共培养体系②中，与GM相关的CK组，其上清IL-17和IFN-γ的蛋白浓度显著高于CP组。体内试验以C57BL/6小鼠为研究对象，尾静脉注射试验细菌后动态观测其肝脏炎性灶的形成，病理检测显示，CK组小鼠的肝脏炎性灶明显多于CP组。综上，CK菌具有明显活化树突状细胞的功能并可诱导Th亚群向Th1/Th17方向分化，进而介导炎症形成。本研究首次探讨了人类体表最常见寄生菌——棒状杆菌的免疫刺激功能，揭示其可能通过介导免疫失衡而致病。截至2014年底，本课题组已发表被SCI收录的论文四篇，另有两篇正在投稿中。此外，共培养三名硕士研究生。