中文摘要：

本项目是为期一年的国家自然科学基金小额资助项目。该项目克隆了桂花鱼的3个rDNA基因和2个间隔序列，构建了通用基因打靶载体、桂花鱼专用多位点打靶载体、干扰素基因多位点打靶载体3个载体。建立了桂花鱼精子介导的基因转移技术，用鳜鱼rDNA基因及其间隔序列作同源重组引导序列，以其重复的间隔序列为靶位点进行基因打靶，经筛选、鉴定获得了基因定点整合并表达的阳性鱼，初步建立了鳜鱼体内多位点基因打靶技术。该研究使基因打靶的靶位点增加到100-300个，将部分解决基因定点整合效率低的问题。靶位点位于活跃的转录单位内，故可解决转基因时外源基因不能稳定表达的部分问题。靶位点为基因间的间隔序列，克服了毒性整合等安全性问题。突破了重复序列不能作为外源基因整合靶位点的禁区。国内外尚无类似研究的报道。该研究将建立高效、安全的多位点基因打靶技术，并建立一套适用于鱼类、甚至大多数动物的基因定点敲入的体内基因打靶技术，有望为多位点基因打靶技术应用于人类基因治疗提供动物体内实验模型。