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利用消减MACS-FACS技术进行巨细胞病毒抗原模拟表位筛选
  • 项目名称:利用消减MACS-FACS技术进行巨细胞病毒抗原模拟表位筛选
  • 项目类别:面上项目
  • 批准号:30471556
  • 申请代码:H1904
  • 项目来源:国家自然科学基金
  • 研究期限:2005-01-01-2007-12-31
  • 项目负责人:柳川
  • 负责人职称:副研究员
  • 依托单位:中国人民解放军军事医学科学院
  • 批准年度:2004
中文摘要:

我们将筛选精度高的流式细胞分选技术(FACS)引入到细菌展示肽库的表位筛选中来,先用混合的正常人血清封闭其可能的结合位点,再与标记的阳性抗体反应,建立消减FACS技术筛选多抗表位。同时引入筛选通量大但精度低的磁式细胞分选技术(MACS)事先进行粗筛,这样将显著提高筛选效率。HCMV感染严重影响人口质量和免疫缺陷人群的健康。该病毒抗原性弱,主要为糖蛋白,尤其难以制备高效价单抗和多抗。本研究拟用上述技

结论摘要:

为了研发人巨细胞病毒(HCMV)疫苗和改进其临床诊断技术,以山羊抗HCMV多克隆抗体为靶从噬菌体展示的随机12肽库筛选抗原表位。生物淘洗富集的噬菌体被测序。获得一个共同序列K-SLSQ(N)-P,计算机分析显示该序列与HCMV gM 蛋白的35-39位氨基酸残基序列高度同源。进一步竞争抑制酶联免疫分析试验、相关的免疫印迹试验等证实上述共有序列含有一个HCMV gM蛋白的线性抗原表位。该表位相应抗体能阻断HCMV AD169株对人胚肺细胞的感染。该表位经基因克隆技术成功在大肠杆菌GI826的鞭毛硫氧还蛋白区展示。重组菌免疫接种小鼠。产生的免疫血清经ELISA和Western blot试验显示可以特异识别和结合表达的HCMV gM 30-78aa片段。该表位肽和HCMV gB AD1及AD2区段作为抗原可以检测患者血清中的抗HCMV IgG。


成果综合统计
成果类型
数量
  • 期刊论文
  • 会议论文
  • 专利
  • 获奖
  • 著作
  • 3
  • 0
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