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1型鸭肝炎病毒致病的细胞与分子机理研究
  • 项目名称:1型鸭肝炎病毒致病的细胞与分子机理研究
  • 项目类别:面上项目
  • 批准号:30871878
  • 申请代码:C180501
  • 项目来源:国家自然科学基金
  • 研究期限:2009-01-01-2011-12-31
  • 项目负责人:司兴奎
  • 负责人职称:教授
  • 依托单位:佛山科学技术学院
  • 批准年度:2008
中文摘要:

对1型鸭肝炎病毒(DHV-1)SG、SN及GD-B株的全基因组序列测定及生物学特性分析,建立了特异敏感的RT-PCR诊断方法;筛选出5株单克隆抗体,对其特异性、细胞染色体及亚型进行鉴定;以纯化后的5G4株单克隆抗体组装成胶体金检测试纸条,检测下限为4.665μg/mL,敏感性、特异性和稳定性良好;将VP1基因分别克隆入pET-32a(+)原核及pFast真核载体,并成功诱导表达;将VP1基因分别进行原核和真核表达系统分段表达,通过IFA和Western-blot鉴定5株单抗识别的为构象表位或为线性表位,明确4F8和5G4均能识别线性表位,进而确定了4F8识别的氨基酸序列为74SGEIILTIV82,氨基酸序列分析提示该序列为DHV-1所特有,能与DHV-2和DHV-3相区分;通过引入限制性内切酶位点将DHV-1 a、b、c、d和e 5个片段顺序相连入pCDNA3.1/V5-HisA质粒载体,采用XhoⅠ线性化后,进行体外转录,转染BHK-21细胞,完成DHV-1的反向遗传操作系统构建,并成功拯救病毒。

结论摘要:

英文主题词Duck hepatitis virus 1; revers genetic system; epitope identification; sequence analysis


成果综合统计
成果类型
数量
  • 期刊论文
  • 会议论文
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  • 著作
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