对1型鸭肝炎病毒(DHV-1)SG、SN及GD-B株的全基因组序列测定及生物学特性分析,建立了特异敏感的RT-PCR诊断方法;筛选出5株单克隆抗体,对其特异性、细胞染色体及亚型进行鉴定;以纯化后的5G4株单克隆抗体组装成胶体金检测试纸条,检测下限为4.665μg/mL,敏感性、特异性和稳定性良好;将VP1基因分别克隆入pET-32a(+)原核及pFast真核载体,并成功诱导表达;将VP1基因分别进行原核和真核表达系统分段表达,通过IFA和Western-blot鉴定5株单抗识别的为构象表位或为线性表位,明确4F8和5G4均能识别线性表位,进而确定了4F8识别的氨基酸序列为74SGEIILTIV82,氨基酸序列分析提示该序列为DHV-1所特有,能与DHV-2和DHV-3相区分;通过引入限制性内切酶位点将DHV-1 a、b、c、d和e 5个片段顺序相连入pCDNA3.1/V5-HisA质粒载体,采用XhoⅠ线性化后,进行体外转录,转染BHK-21细胞,完成DHV-1的反向遗传操作系统构建,并成功拯救病毒。
英文主题词Duck hepatitis virus 1; revers genetic system; epitope identification; sequence analysis