目的:探讨较为优化的小鼠卵母细胞孤雌激活方法,为小鼠孤雌激活研究、胚胎克隆和核移植重构胚激活提供较规范的实验方法与数据。方法:采用单个化学激活剂(乙醇、氯化锶、钙离子霉素)分别与细胞松弛素B联合的实验方法对CD-1小鼠卵母细胞孤雌激活作用进行研究,并对所形成的胚胎进行进一步的培养、形态学观察和分析。结果:乙醇组激活5min较7min、10min的囊胚形成率、囊胚孵出率有显著差异(P〈0.05);氯化锶组激活30min较1h、2h的囊胚形成率、囊胚孵出率有显著差异(P〈0.05);钙离子霉素组激活3min较5min、7min的囊胚形成率、囊胚孵出率有显著差异(P〈0.05);3组问比较,乙醇组较其它两组的卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率方面均有显著差异(P〈0.05)。联合激活中,两种物质同时激活较先后激活有显著差异(P〈0.05)。经H—E染色,激活胚胎的卵裂球细胞核呈蓝紫色、胞质呈粉色,与正常授精的胚胎卵裂球形态相同。结论:①乙醇与细胞松弛素B联合激活法对小鼠卵母细胞行孤雌激活5min在卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率等方面均有明显优势。②联合激活方法比单纯激活剂激活率高,联合激活中,两种激活剂同时应用较先后应用激活效果好,并且实验方法简单、激活时间缩短,减少非激活因素对卵母细胞的影响。③从一般形态观察,提示激活胚胎形态和发育均较正常,乙醇组激活的胚胎可能更具有后续发育潜能,这是激活目的重要所在。