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嵌合鞭毛蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)和沙门菌SL5928中的表达与组装分析
  • ISSN号:1000-3061
  • 期刊名称:《生物工程学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q51[生物学—生物化学]
  • 作者机构:[1]扬州大学江苏省高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009, [2]扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏扬州225009
  • 相关基金:国家自然科学基金(Nos.31320103907,31372414); 江苏省优势学科资助
中文摘要:

鞭毛蛋白根据能否组装可以表达为单体或多聚体。目前,关于它们之间的区别少有报道。文中,将重组质粒p ET-fli C/M2e2分别导入大肠杆菌BL21(DE3)和沙门菌SL5928中来表达嵌合鞭毛蛋白mfli C/M和pfli C/M,然后分析它们的组装特性。SDS-PAGE结果表明,两重组菌成功表达了嵌合鞭毛蛋白。透射电镜观察显示,在重组大肠杆菌表面未见鞭毛,而重组沙门菌表面呈现鞭毛。将嵌合蛋白纯化后,圆二色谱(Circular dichroism,CD)分析表明,两者的CD信号明显不同,pfli C/M的CD信号与野生型鞭毛蛋白一致,而mfli C/M基本上没有CD信号出现。动态光散射分析表明,mfli C/M的聚集程度明显低于pfli C/M。将嵌合蛋白转染小鼠腹腔细胞3 h后,两者均能诱导产生IL-1β,但mfli C/M组高于pfli C/M组。以上结果对于鞭毛蛋白表达形式的选择具有重要的参考价值。

英文摘要:

Flagellin can be expressed in monomeric or polymeric form based on assembly. The difference of these two forms of flagellin is less studied. In this experiment, recombinant plasmid p ET-fli C/M2e2 was transferred into Escherichia coli BL21(DE3) and Salmonella SL5928 to express chimeric flagellin, mfli C/M and pfli C/M, respectively, and then their assembly characteristics were analyzed. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis results indicated that the two recombinant bacteria could successfully express chimeric flagellin. The transmission electronic microscope observation showed that no flagella were found on the surface of recombinant E. coli, whereas it was found for recombinant Salmonella. After purification, distinct circular dichroism spectra between them were found and pfli C/M showed the similar structure as wild-type flagellin, but not for mfli C/M. The dynamic light scattering assay also indicated that the polymerization of mfli C/M was much lower than that for pfli C/M. Three hours after transfection into mouse peritoneal macrophages, both could induce interleukin 1β secretion, but mfli C/M is stronger than pfli C/M. These data will be helpful for the selection of expression form of flagellin.

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期刊信息
  • 《生物工程学报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学院
  • 主办单位:中国科学院微生物研究所 中国微生物学会
  • 主编:杨胜利
  • 地址:北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所内B401室
  • 邮编:100101
  • 邮箱:cjb@im.ac.cn
  • 电话:010-64807509
  • 国际标准刊号:ISSN:1000-3061
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1998/Q
  • 邮发代号:82-13
  • 获奖情况:
  • 北京市优秀科技期刊期刊奖,中国科协首届优秀学术期刊奖,2000年中科院优秀科技期刊二等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 俄罗斯文摘杂志,美国化学文摘(网络版),波兰哥白尼索引,荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,美国剑桥科学文摘,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:18441