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细胞实验检测蓖麻蚕蛹生物反应器表达的重组人表皮生长因子的生物学活性
  • ISSN号:0253-4304
  • 期刊名称:《广西医学》
  • 时间:0
  • 分类:Q78[生物学—分子生物学] Q74[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]广西医科大学研究生学院,南宁市530021, [2]广西医科大学医学科学实验中心,南宁市530021
  • 相关基金:广西科学研究与技术开发计划项目(10100019-20)
中文摘要:

目的探讨蓖麻蚕蛹生物反应器中分离纯化获得的重组人表皮生长因子(rhEGF)蛋白质的生物学活性。方法采用Tricine-SDS-PAGE和免疫印迹法(Westernblot)鉴定rhEGF,通过MTY和台盼蓝法检测rhEGF的细胞活性。结果Tricine-SDS-PAGE、Westernblot结果显示,蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF具有正确的分子量和免疫原性;MTY法显示,纯化的rhEGF具有酶促活性,且酶促活性优于rhEGF标准蛋白(P〈0.05),其最高活性浓度为1.0μg/L,在0.0625-1.0μg/L浓度范围内具有剂量依赖性;rhEGF能够促进Balb/c3T3细胞的分裂增殖,效果优于rhEGF标准蛋白(P〈0.05)。结论AnpehEGF感染的蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF,具有类似天然hEGF的生物学活性,且效果优于rhEGF标准蛋白;rhEGF的细胞实验为进一步的动物实验提供了基础。

英文摘要:

Objective To study the biological activity of purified recombinant human epidermal growth factor (rhEGF) obtained from Samia cynthia ricini pupae bioreactor. Methods rhEGF was identify by Tricine-SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (Tricine-SDS-PAGE) and Western blot, then methyl thiazolyl tetrazolium (MTI') assay and trypan blue staining technique were performed for the detection of the biological activity of balb/c3T3 cell. Results Successful expression of desired proteins could be observed by methods of Tricine-SDS-PAGE and Western blot. MTI" assay showed that the purified rhEGF caused the promotion of the enzyme activity in Balb/c3T3 cell in a dose-dependent manner ranged from 0.0625 to 1.0 μg/L. The best concentration in enzyme activity promoting was 1.0 μg/L, and its effect was stronger than that of standard rhEGF(P 〈 0.05). The purified rhEGF could stimulate the proliferation of Balb/c3T3 ,and its effect was much more stronger in proliferation stimulating compared with the standard rhEGF(P 〈0.05). Conclusion The purified rhEGF obtained from Samia cynthia ricini pupae bioreactor has similar biological activity with natural hEGF ,which has a better effect compared with standard rhEGF. This research provides a basis for the further animal test of rhEGF.

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期刊信息
  • 《广西医学》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:广西壮族自治区卫生和计划生育委员会
  • 主办单位:广西壮族自治区医学科学信息研究所
  • 主编:王红宇
  • 地址:广西南宁市东葛路20-7号
  • 邮编:530022
  • 邮箱:gxyx@gxmi.net
  • 电话:0771-5871020
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-4304
  • 国内统一刊号:ISSN:45-1122/R
  • 邮发代号:48-29
  • 获奖情况:
  • 2006年被评为第五届广西优秀自然科学期刊2007年...
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),中国中国科技核心期刊
  • 被引量:41545