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鸡抗病毒Mx蛋白修饰及其真核表达载体的构建
  • ISSN号:0366-6964
  • 期刊名称:《畜牧兽医学报》
  • 时间:0
  • 分类:S831.2[农业科学—畜牧学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]扬州大学动物科学与技术学院,扬州225009
  • 相关基金:国家自然科学基金资助项目(30671509);高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20061117004)
中文摘要:

利用高保真RT-PCR的方法从Poly(I)·Poly(C)诱导的鸡成纤维细胞总RNA中扩增出鸡全长Mx cDNA,扩增产物克隆到pMD19-T Simple载体上,利用PCR突变技术将其第2 032位的碱基由G突变为A,经克隆测序证实突变成功后,将已突变的Mx基因插入真核表达载体,通过PCR、酶切鉴定插入片段正确,提取质粒转染COS-Ⅰ细胞进行RT-PCR鉴定。结果表明:正确克隆了鸡Mx基因,并成功对该基因进行PCR诱变修饰,构建了能够表达鸡Mx基因的重组真核表达载体,为Mx基因体内外表达及生物学活性的进一步研究奠定了基础。

英文摘要:

A full-length cDNA of chicken Mx gene was obtained using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) amplification of total RNA extracted from chicken embryo fibroblast (CEF) which was induced with Poly(I)·Poly(C). The RT-PCR product was subcloned into pMD19-T Simple Vector and mutagenesis was performed in PCR site-directed mutagenesis, sequencing analysis confirmed the successful mutation from G to A in the site 2 032 of chicken Mx cDNA. The fragments amplified by PCR containing the mutation site were subcloned into an eukaryotic expression vector, then transfected into COS-Ⅰ cell. Enzyme, PCR and RT-PCR analysis indicated that the recombinant expression plasmid pcDNA3.0-MMx was successfully constructed, which may provide a basis of expression of Mx protein genes in vivo and in vitro and its specific biological activity research.

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期刊信息
  • 《畜牧兽医学报》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国畜牧兽医学会
  • 主编:文杰
  • 地址:北京海淀区圆明园西路2号中国农科院畜牧所
  • 邮编:100193
  • 邮箱:xmsyxb@263.net
  • 电话:010-62815987 62816996
  • 国际标准刊号:ISSN:0366-6964
  • 国内统一刊号:ISSN:11-1985/S
  • 邮发代号:82-453
  • 获奖情况:
  • 1992年北京优秀期刊奖,1998年、2000年在全国畜牧兽医优秀期刊评比中获一等奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),英国农业与生物科学研究中心文摘,波兰哥白尼索引,美国剑桥科学文摘,英国动物学记录,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),瑞典开放获取期刊指南,中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:21857