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利用切片免疫荧光技术研究Tbx5在小鼠胚胎心脏中的表达
  • ISSN号:1007-7146
  • 期刊名称:《激光生物学报》
  • 时间:0
  • 分类:Q71[生物学—分子生物学]
  • 作者机构:[1]湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室,心脏发育研究中心,湖南长沙410081
  • 相关基金:国家自然科学基金项目(30671053,30871340,30930054,30900851);国家重点基础研究发展计划项目(2005CB522505)
中文摘要:

从野生型成体果蝇体内提取总RNA,以cDNA作为模板进行PCR扩增,获取Dox-A3部分基因片段,将这片段连接于原核表达载体pET-28a上,成功构建重组质粒pET-28a-Dox-A3.将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,用ITPG诱导表达出融合蛋白,然后将经Ni-IDA凝胶柱纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备Dox-A3多克隆抗体,通过Western-Blot检测效价和特异性.结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体.

英文摘要:

The total RNA of drosophila was extracted and reverse transcripted into cDNA. Dox - A3 partial coding sequence was obtained by PCR amplification, and inserted into pET28a vector in frame. The reconlbinant plasnmid pET- 28a - Dox - A3 was succeeded constructed. It was transformed into E. coli rosetta and then induced by IFTG to express Dox - A3 protein in E. coli rosetta expression system. The Dox - A3 protein was purified by Ni - NTA affinity chromatography under denaturing conditions. Then the New Zealand white rabbits was immuned with purified recombinant protein to get antibody. The antibody titer and specificity was identified by Western Blot. The result showed that the high quality multi- elonal antibody was obtained.

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期刊信息
  • 《激光生物学报》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国遗传学会
  • 主编:胡能书
  • 地址:长沙市麓山路36号湖南师范大学生命科学学院内
  • 邮编:410081
  • 邮箱:jgswxb@hunnu.edu.cn
  • 电话:0731-8872208
  • 国际标准刊号:ISSN:1007-7146
  • 国内统一刊号:ISSN:43-1264/Q
  • 邮发代号:42-194
  • 获奖情况:
  • 2000年12月荣获首届《CAI-CD》执行优秀奖
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),中国中国科技核心期刊
  • 被引量:5516