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酵母双杂交系统筛选和验证与RARα-V相互作用的蛋白
  • ISSN号:0253-2727
  • 期刊名称:《中华血液学杂志》
  • 时间:0
  • 分类:R446.61[医药卫生—诊断学;医药卫生—临床医学] R392.11[医药卫生—免疫学;医药卫生—基础医学]
  • 作者机构:[1]重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆400016
  • 相关基金:基金项目:国家自然科学基金(30300449);国家中医药管理局课题(02-03ZP52)
中文摘要:

目的利用酵母双杂交技术筛选与RARα-V相互作用的蛋白,研究RARα-V的作用靶点及其生物学功能。方法构建诱饵质粒pGBKT7-RARα-V,利用酵母双杂交技术从K562细胞cDNA文库中筛选与RARα-V相互作用蛋白的基因序列,并通过酵母回转试验与GST pull-down技术进行验证。结果成功构建诱饵质粒,且没有毒性、渗漏和自激活现象;利用酵母双杂交技术筛选到16个能与RARα-V相互作用的蛋白质;经酵母回转试验得到8个阳性克隆;并经GST pull-down技术在体外验证了RARα-V与JTV-1蛋白的相互作用。结论在细胞内RARα-V与多种蛋白有相互作用,白血病的发病机制可能与这些蛋白相互作用所致的生物学功能改变有关。

英文摘要:

Objective To screen the protein interacting with retinoic acid receptor variant protein (RARα-V) via the yeast two-hybrid technique(YTHT) and to find out the targets protein and study its biological function. Methods The bait vector of pGBKT7-RARα-V was constructed for screening proteins inter-acting with RARα-V in K562 cell eDNA expression library via YTHT. The protein-protein interaction was confirmed with re-transformation in yeast and GST pull-down in vitro. Results The bait vector was success-fully constructed without toxicity, leakage and serf-activation. Sixteen proteins were screened by YTHT and eight positive clones were identified by retransformation in yeast. The interaction between RARα-V and JTV- 1 was confirmed by GST pull-down in vitro. Conclusions There are some kinds of proteins interacting with RARα-V in cell. The biological dysfunction caused by certain protein-protein interaction may be involed in the pathogenesis of leukemia.

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期刊信息
  • 《中华血液学杂志》
  • 中国科技核心期刊
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中华医学会
  • 主编:
  • 地址:天津市南京路288号
  • 邮编:300020
  • 邮箱:cnblood82@yahoo.com.cn
  • 电话:022-27304167
  • 国际标准刊号:ISSN:0253-2727
  • 国内统一刊号:ISSN:12-1090/R
  • 邮发代号:6-54
  • 获奖情况:
  • 中国期刊方阵“双效”期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),荷兰文摘与引文数据库,美国生物医学检索系统,日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版),中国北大核心期刊(2000版)
  • 被引量:25538