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非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用
  • 期刊名称:中国预防兽医学报
  • 时间:2011.8.8
  • 页码:589-592
  • 分类:S852.65[农业科学—基础兽医学;农业科学—兽医学;农业科学—畜牧兽医]
  • 作者机构:[1]山东农业大学动物医学院/免疫生物学实验室,山东泰安271018, [2]西北农林科技大学兽医免疫学研究所动物医学院,陕西杨凌712100
  • 相关基金:国家自然基金(30871857、U0931003/L01);山东省自主创新成果转化重大专项(2008ZHZXlAll01);国家行业科技计划项目(200903055)
  • 相关项目:猪蓝耳病病毒感染和致病的分子机理
中文摘要:

为研究非肌肉肌球蛋白II型重链A(NMHCII-A)羧基端在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞中的作用,本实验通过提取Marc-145细胞总RNA,RT-PCR方法扩增NMHCII-A羧基端930bp基因PRA,并进行核苷酸序列测定。将该基因连接到pEGFP-N1载体中,采用双酶切和PCR方法对重组质粒pEGFP-N1-PRA进行鉴定。将pEGFP.N1-PRA转染至Marc-145细胞后感染PRRSV,测定TCID50值及间接免疫荧光(IFA)检测PRA对PRRSV感染Marc-145细胞的影响。TCID50及IFA结果显示,与未转染的Marc-145细胞相比,转染pEGFP.N1-PRA的Marc.145细胞的PRRSV感染能力降低50%。本研究初步证明了PRA编码蛋白在PRRSV感染细胞中的作用,为PRRSV感染机制的研究提供了一定的依据。

英文摘要:

To investigate the function of C-terminus nonmuscle myosin heavy chain II-A (NMHC II -A) to porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection of Marc-145 cells, a part of NMHC II -A gene (PRA) from Marc-145 cells was amplified by RT-PCR and cloned into pEGFP-N1 vector to construct recombinant plasmid pEGFP-N1-PRA for PRA overexpression in Marc-t45 cells. The results showed that the repliccation of PRRSV in the pEGFP-N1-PRA transfected Marc-145 cells was decreased by 50% in comparison with non-transfected cells by TCID50 titration and immunofluorescent assay. These results showed PRA encoding protein could influent PRRSV infection to Marc-145 cells. This finding provide a new way for further understanding of PRRSV infection to permissive cells.

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