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家蚕微孢子虫细胞分裂周期蛋白N端编码序列在酿酒酵母中的启动子活性分析
  • ISSN号:0257-4799
  • 期刊名称:蚕业科学
  • 时间:2011
  • 页码:688-694
  • 分类:S884.21[农业科学—特种经济动物饲养;农业科学—畜牧兽医] Q51[生物学—生物化学]
  • 作者机构:[1]西南大学蚕学与系统生物学研究所,重庆400716, [2]西南大学动物科技学院,重庆400716, [3]重庆师范大学生命科学学院,重庆400047
  • 相关基金:高等学校学科创新引智计划(No.B07045); 国家自然科学基金重点项目(No.30930067)
  • 相关项目:家蚕微孢子虫孢壁蛋白质组及其在侵染中的作用研究
中文摘要:

微孢子虫(microsporidia)长期专性细胞内寄生,其基因组表现出显著的减缩性。利用家蚕微孢子虫(Nosema bomby-cis)基因组数据库探究在其显著减缩的基因组中是否有编码序列发挥调控序列的作用,结果发现在DNA转录调控中发挥重要作用的细胞分裂周期蛋白(cell division cycle protein)的N端编码序列具有典型的真核生物启动子序列特征。设计引物扩增该基因N端590 bp包含启动子基序的序列(C启动子序列),将该启动子序列克隆到载体启动子(MET25-P)被终止序列(CYC1-T)替代的pUG35载体上,构建由该启动子序列启动下游绿色荧光蛋白(GFP)表达的克隆载体ΔpUG35-CYC1-T-C-yEGFP-CYC1-T,并将其电击转化酿酒酵母CEN.PK2菌株,经筛选及诱导培养后,在荧光显微镜下观察到酵母中有GFP表达,证实了家蚕微孢子虫细胞分裂周期蛋白的N端编码序列包含具有启动子活性的序列,表明家蚕微孢子虫基因组减缩后,部分编码序列可能扮演了调控序列的角色。研究结果也为微孢子虫启动子的活性验证提供了一个简便的途径。

英文摘要:

As to long term intracellular parasitism,the genome reduction of microsporidia was significant.We surveyed the genome data of Nosema bombycis to identify whether there is any coding sequence acting as the promoter sequence in such significantly reduced genome.We found that there are typical characteristics of the eukaryotic promoter in the N-terminal coding sequence of cell division cycle protein(CDCP) which plays an important role in regulation of DNA transcription.We designed specific primers to amplify this gene's N-terminal 590 bp which contained the promoter motif sequence(C promoter sequence).Subsequently,we cloned it into the pUG35 vector of which the promoter(MET25-P)was replaced with the termination sequence CYC1-T to construct the vector ΔpUG35-CYC1-T-C-yEGFP-CYC1-T that had the 590 bp promoter sequence to activate expression of its downstream green fluorescent protein(GFP).We transformed this vector into the Saccharomyces cerevisiae CEN.PK2 strain by electroporation,and obtained the positive clone.After screening and induction culture,fluorescence microscopic observation showed signals of GFP expression,verifying that the N-terminal coding sequence of cell division cycle protein of N.bombycis has promoter activity.This phenomenon indicates that some coding sequences could act as regulatory elements in the reduced genome of N.bombycis.Our work also provides a simple method to test the promoter activity of microsporidia.

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期刊信息
  • 《蚕业科学》
  • 北大核心期刊(2011版)
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中国蚕学会 中国农业科学院蚕业研究所
  • 主编:郭锡杰
  • 地址:江苏省镇江市四摆渡中国农业科学院蚕业研究所
  • 邮编:212018
  • 邮箱:CYKE@chinajournal.net.cn
  • 电话:0511-85616835
  • 国际标准刊号:ISSN:0257-4799
  • 国内统一刊号:ISSN:32-1115/S
  • 邮发代号:28-23
  • 获奖情况:
  • 中国科协优秀科技期刊,全国农业学会优秀期刊
  • 国内外数据库收录:
  • 美国化学文摘(网络版),日本日本科学技术振兴机构数据库,中国中国科技核心期刊,中国北大核心期刊(2004版),中国北大核心期刊(2008版),中国北大核心期刊(2011版),中国北大核心期刊(2014版)
  • 被引量:7742