中文摘要：

把新近发展迅速的RNAi技术引入植物抗病毒基因工程，并作了拓展。把来自两个不同植物病毒（PVX和PVY）的基因构建成融合基因，进而构建该融合基因的反向重复序列表达载体，农杆菌介导把融合基因反向重复序列转入马铃薯，通过Southern blot 和攻毒后的ELISA 检测，最终目的获得对两个病毒具有双重高抗或免疫的转基因植株，为获得双免疫甚至多免疫转基因植物提供新思路。通过攻毒前后的Nortern blot 和siRNA检测验证该途径的抗病机制.根据RNAi作用机理,融合基因反向重复序列转录后形成的dsRNA 结构会降解成siRNA，进而介导入侵病毒同源mRNA降解，转基因mRNA不存在或存在量很少，避免了病毒重组的风险。马铃薯无性繁殖，转基因株无性后代基因型一致,对不同植株用2个病毒同时攻毒，先后攻毒及单独攻毒，获得完整可靠的双免疫实验资料，无技术难题，试验程序简单.

结论摘要：

病毒侵染导致品种退化是马铃薯生产中的一大难题，严重影响产量和品质。项目把RNA沉默技术引入马铃薯抗病毒基因工程，构建了马铃薯X病毒外壳蛋白基因（cp）片段和马铃薯Y病毒复制酶基因(NIb)片段的融合基因反向重复序列无标记表达载体，农杆菌介导把反向重复序列转入马铃薯，培养基不加筛选试剂，直接利用PCR检测转化体，PCR阳性率可达4.1-8.3%。转化体切段繁殖，建立无性系。转基因试管苗移栽到温室，混合接种马铃薯X病毒和Y病毒，DAS-ELISA检测结果表明，PVX-cp与PVY-Nib中游片段的融合基因反向重复序列和PVX-cp与PVY-Nib下游片段的融合基因反向重复序列介导的双抗性无明显差异，均略高于PVX-cp与PVY-Nib上游片段的融合基因反向重复序列。siRNA的Northern blot结果表明，能检测到siRNA的转基因植株，对应的同一无性系的接病株不表现感病症状，说明双抗性是RNA沉默的结果。进一步的田间接种鉴定结果表明，双抗性能通过无性繁殖稳定传递并且在温室或在大田条件下都能充分表现。这项研究为培育抗多种病毒的、生物安全性更高的转基因马铃薯作了有益的探索。