中文摘要：

成功构建人工miRNA簇表达载体，串联的miR-34a和miR-424均可获得表达。荧光素酶实验结果表明miRNA的加工对携带miRNA宿主基因蛋白的表达有显著的影响。此外转染人工miRNA簇pEGFP-34a-424的肝癌细胞G0/G1的细胞数目(90.15%)较pEGFP-34a (84.44%)和pEGFP-424(85.84%)增多。这说明人工miRNA簇抑制肿的效果要好于单个miRNA分子。qRT-PCR方法检测25例HCC肿瘤组织及其癌旁组织中miR-183的表达，结果显示68%的肿瘤组织中miR-183的表达显著上调（2~300倍）。运用TargetScan生物信息学工具预测miR-183潜在的靶基因，荧光素酶报告基因技术证实PDCD4是miR-183直接作用的靶，western blot和qRT-PCR结果表明miR-183能够下调PDCD4的mRNA及蛋白水平的表达。PDCD4是TGF-β1诱导的肝癌细胞凋亡通路上的重要分子，在HCC中表达下调，DAPI细胞染色和Annexin-V分析均显示转染miR-183后TGF-β1的凋亡诱导作用受到抑制。