中文摘要：

副猪嗜血杆菌是当前严重危害世界养猪业的重要病原菌，人们对其致病机理和免疫机理仍不甚了解。在本课题执行期间，国内外有研究分别利用基因芯片技术、细菌全基因组测序、蛋白质双向电泳等高通量技术分析和预测副猪嗜血杆菌的功能基因。然而，由于缺乏有效的遗传操作系统，没有任何研究对这些基因的功能进行验证的报道。本研究以我国流行的副猪嗜血杆菌血清5型菌株SH0165为材料，利用体内诱导抗原技术筛选和鉴定该菌的体内表达抗原基因，通过反复筛选和鉴定最终获得23个体内诱导表达的基因，并且对这些基因的功能进行了预测和分析，其结果为该菌的免疫与致病机理提供了参考和依据。另一方面，本研究还利用该菌内源性质粒pYC93构建了一种能在大肠杆菌与副猪嗜血杆菌中稳定遗传的穿梭载体pSHK4，同时构建了该菌的温敏质粒pUK-T。在细菌转化方面，穿梭载体pSHK4和温敏质粒pUK-T电转化副猪嗜血杆菌SH0165获得了理想的转化效率，可以应用于该菌目标基因缺失突变株以及相应互补菌株的构建。该研究在副猪嗜血杆菌电转化方法以及遗传操作系统的构建方面获得了突破，为通过基因敲除的方法验证副猪嗜血杆菌的功能基因提供了宝贵的材料。