中文摘要：

细胞周期存在着许多调控机制，细胞周期检查点(cell cycle checkpoint) 是细胞周期的最重要调控机制之一。研究发现放射诱导的G2延迟对细胞的放射敏感性有非常重要的影响。在A1-5细胞中，我们观察到极强的抗辐射性并伴随非常强的G2检查点响应，并认为Chk1而不是Chk2途径在A1-5细胞特殊的表型上起着主要的作用。本研究将确定AA12怎么调节Chk1的表达及它们之间的相互作用关系，并

结论摘要：

在大肠杆菌中表达了MEPE/OF45/AA12(OF45)的部分片段LG21，纯化后免疫小鼠制备出多克隆抗体，该抗体可以与细胞中的OF45蛋白特异结合并可用于免疫共沉淀实验。随后用免疫共沉淀实验确定了OF45与CHK1在体内能够相互作用，同时用酵母双杂交及GST沉降技术确定了这两个蛋白在体外也能相互作用。构建一系列OF45截短缺失突变体，通过细胞免疫荧光染色及免疫共沉淀方法确定OF45与CHK1相互作用的结构域在OF45蛋白C端400-418aa之间。随后，获得了稳定表达Mepe/of45M(缺失OF45第400-418aa的突变体)和Mepe/of45的B4细胞株及稳定表达反义Mepe/of45的A1-5细胞株，研究了OF45对细胞辐射敏感性及G2延迟的影响。结果表明Mepe/of45表达下调后细胞的抗辐射性消失，Mepe/of45表达上调后细胞的抗辐射性有所增加并且出现了G2延迟现象，而表达突变体Mepe/of45M的细胞不再具有抗辐射性，G2延迟现象也消失，说明OF45与CHK1相互作用对细胞的抗辐射性有重要影响。本研究为阐明细胞周期调控机制及今后放射治疗的靶分子研究提供了线索。