中文摘要：

角朊细胞分泌的CCL20在招募朗格罕斯细胞迁移到表皮﹑启动机体对皮肤的移植排斥反应中起关键作用。角朊干细胞是组织工程皮肤种子细胞的良好来源。用CCL20基因下调修饰的角朊干细胞将培养出具有抗排斥作用的角朊细胞移植物。本项目以免疫磁珠法分选的人角朊干细胞为对象，采用RNAi技术构建CCL20-siRNA 表达载体﹑转染人角朊干细胞；用酶联免疫法或蛋白免疫印迹等技术筛选CCL20基因表达抑制的人角朊干细胞克隆, 制备成相应的人角朊细胞培养物；观察其异种移植后对受者朗格罕斯细胞向表皮迁移的影响，以及受者对角朊细胞移植物的排斥反应和存活时间。这将从间接抗原提呈途径的角度初步阐明CCL20在皮肤移植排斥反应中的作用，为低排斥反应的组织工程皮肤种子细胞提供一种新的来源，也对研发其它组织工程产品具有重要的参考价值。

结论摘要：

角朊细胞分泌的CCL20在皮肤排斥反应中起关键作用。本项目研究了CCL20基因修饰的角朊干细胞是否可以作为低排斥反应组织工程皮肤种子细胞的一种新来源。本项目率先用CD49f和CD71双标记的免疫磁珠分选法获得CD49fbriCD71dim的人角朊干细胞，并成功培养出人角朊干细胞克隆；首先发现人永生化角朊细胞系HaCaT细胞具有许多角朊干细胞的表型特征，目前常用的角朊干细胞表型CD49fbriCD71dim和K19+分别为16.6±2.8％和14.9±1.2％)，而CD29（整合素β1）表型更高达49.6±6.7％，表明可利用HaCaT细胞替代角朊干细胞作为基因操作的靶细胞。本项目成功构建出CCL20-siRNA慢病毒表达载体，并证明它们对HaCaT细胞和人角朊干细胞表达CCL20mRNA和分泌CCL20蛋白均具有显著的下调效果。本项目首先制备出了具有"鸟巢状"结构的异种脱细胞真皮，成功实现了人永生化角朊细胞与异种脱细胞真皮支架的三维培养，得到具有复层表皮结构的新型人组织工程皮肤。这些研究结果为构建低免疫原性的新型人组织工程皮肤建立了坚实的技术平台。