中文摘要：

酒精性肝病（ALD）发病机制复杂，危害严重，且临床尚无有效治疗手段，已成为全球关注的公共卫生问题。研究认为，氧化应激是ALD发病过程中的关键环节，通过调控肝细胞信号转导通路，影响ALD的发生、发展。4-羟基壬烯酸（4-HNE）是肝脏长期暴露于酒精后诱发氧化应激而产生的一种致敏因子。我们前期研究表明4-HNE通过抑制肝细胞内TNF-α介导的NF-κB抗凋亡信号通路诱导ALD的发生，而且清除4-HNE可以逆转肝细胞死亡，但机制尚不清楚。因此本课题拟通过蛋白质互作技术和RNA沉默技术深入研究4-HNE抑制NF-κB信号通路的确切作用机制及靶点，拟从细胞信号调控及表观遗传学水平阐明4-HNE促TNF-α介导的肝细胞死亡的作用机理，并从体内和体外水平揭示ALD的发病机制。为ALD临床治疗提供新的策略，也为以4-HNE为靶点的治疗ALD的新型药物研发提供重要的理论指导和依据。

结论摘要：

本研究通过体内动物实验和体外细胞实验研究TNF诱导4-HNE致敏肝细胞发生细胞死亡的作用，以期阐明基于NF-κB/ IκBα信号通路4-HNE/TNF协同诱导酒精性肝病的分子机制。结果⑴体内动物实验: 和对照组相比，ALD模型组小鼠肝脏内甘油三酯、TNF水平升高 (P <0.01)， 4-HNE蛋白质加合物表达增强，肝细胞脂质变性、凋亡数量增加，血浆中丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平升高(P <0.01)；肝细胞核内NF-κB（p65）与DNA的结合活性下降，p65蛋白表达减弱，IκBα蛋白磷酸化表达减弱，4-HNE-IκB加合物表达增强。(2)体外细胞实验:①在HepG2及小鼠原代肝细胞中，与TNF组相比,4-HNE/TNF组肝细胞增殖活性下降,随着4-HNE、TNF浓度的增加，增殖活性呈剂量依赖性降低，细胞凋亡增多，细胞释放的乳酸脱氢酶活性升高(P＜0.05)，4-HNE/TNF组明显诱导PPAR蛋白剪切。②在HepG2细胞和小鼠原代肝细胞中,随着4-HNE浓度升高，细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物增多，与TNF组相比，4-HNE/TNF组肝细胞内4-HNE与IκBα形成的蛋白质加合物增多，IκBα的蛋白磷酸化水平降低。③随着4-HNE浓度升高,HepG2细胞核内NF-κB (p65)与DNA的结合活性下降,NF-κB调控基因(cFLIP、cIAP、Bcl-2)的mRNA表达水平下降。④4-HNE对TNF诱导的IKK无明显作用。⑤苯扎贝特通过清除4-HNE来减轻酒精性肝损伤。⑥NA能逆转 H2O2诱导的酒精性肝损伤，但对4-HNE诱导的酒精性肝损伤无明显作用。本研究结果表明，长期饮酒导致肝细胞内4-HNE和TNF的含量增加，TNF诱导了4-HNE致敏的肝细胞死亡，4-HNE作为一个肝细胞致敏因子，可以通过抑制TNF介导的NF-kB抗凋亡信号通路诱导肝细胞死亡，是ALD发生、发展过程中独立于氧化应激的一个新机制。然而，4-HNE与IκBα结合的靶点和机制有待进一步研究。