中文摘要：

本项目致力于开发结核杆菌热休克蛋白70（Mt.HSP70）作为HBV核心抗原CTL表位肽载体的可能性。将HBcAg(18-27)CTL 肽融合到Mt.HSP70的C端，同时引入HBV免疫优势性Th或B细胞表位，构建融合表达载体，应用Pichia pastoris GS115酵母分泌表达融合蛋白。以BALB/C纯系小鼠和具有相同遗传背景的HBV转基因小鼠为实验对象，进行体内免疫学功能研究；考察小鼠骨

结论摘要：

本研究证实结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)可作为乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位肽载体诱导HBV特异性免疫应答。应用毕赤酵母分泌表达HSP70(P1)、HSP70-HBcAg(18-27)(P2)、HSP70-PreS2B(18-24)-PreS2Th(37-53)-HBcAg(18-27)(P3)。体外考察重组蛋白对慢性乙型肝炎外周血来源的树突状细胞(DC)和淋巴细胞的作用，结果表明P1、P2、P3能诱导DC细胞成熟，上调CD1a、CD40、CD86表达，释放Th1型细胞因子IL-12p70和TNFα，P3能激活自体淋巴细胞成为细胞毒活性细胞。体内免疫应答以Balb/C小鼠和相同背景HBV转基因小鼠为研究对象，行流式细胞术分析免疫后小鼠外周血和脾细胞中CD4+T、CD8+T、NK、DC细胞比率，结果显示P3最能激活CD4+T、CD8+T、NK、DC增殖，与肝脏CD4+T、CD8+T免疫组化和HBV细胞毒活性相一致，单纯HSP70没有杀伤活性。通过FITC标记的重组蛋白与DC相互作用证实P3与HSP70均通过CCR5受体作用于DC细胞。