本实验应用PICK1基因敲除小鼠,同时采用膜片钳、钙影像、RT-PCR、western blotting和免疫荧光技术,探讨PICK1基因敲除对ASICs介导的神经元损伤的影响及其机制。结果发现(1) 证明PICK1 基因敲除后ASIC电流幅度减少、酸诱导的钙释放减少,其机制可能是PICK1的缺失导致ASICs发生定位的改变,其蛋白从膜上转运到胞浆内所致,即ASICs的下膜作用。(2) 发现PICK1基因敲除后对离体和在体缺血性脑损伤有保护作用。(3)发现PKC对ASICs功能的正性调节作用,PKA对ASICs功能的负性调节作用均依赖于PICK1基因的存在,PICK1在其中起到了桥梁作用。(4)发现一系列对缺血性脑损伤具有保护作用的药物,如黄芩素、丹参酮、葛根素等。本研究初步阐明PICK1在ASICs介导的缺血性损伤中的作用及其分子机制,并为研发以ASIC和PICK1为靶点的新型神经元保护剂提供了理论和实验依据。
英文主题词PICK1;ASICs;ischemic brain injury; gene knock-out