中文摘要：

已知SCF/c-kit信号分子对造血干细胞等多种细胞的发育、迁移、存活和死亡等具有重要调控作用。本课题组对KIT定位研究发现正常小鼠肠粘膜上皮亦表达c-kit及其产物KIT，但其生物学意义尚不清楚。因此本项目拟①利用c-kit点突变小鼠模型，结合现代形态学和分子生物学研究方法，确定小鼠肠粘膜上皮表达KIT的细胞类型；②通过Brdu摄入和Imatinb抑制KIT活性，使用qRTPCR和Western结合显微激光切割等实验，明确KIT在肠上皮细胞更新过程中的调控作用与机制；③经小鼠阴茎背静脉注射E. Coli和LPS，分别制作菌/毒血症全身感染动物模型，研究KIT在维持肠上皮结构和功能完整性中的作用；④给予实验动物AOM和DSS药物，研究KIT在肠上皮非典型增生-肠息肉-癌前病变-结直肠癌等病变过程中的作用与机制，阐明KIT在肠粘膜上皮表达的病理生理意义，为临床相关疾病的治疗提供新靶点。

结论摘要：

本项目为一年期的小额资助，主要进行了一些基础研究，在中国解剖学报、Cell Tissue Res.和 Histol Histopathol.杂志发表论著各1篇，在此基础上，获得了2014-2017年的面上项目资助，继续进行该课题的相关研究。 KIT广泛表达于造血祖细胞、肥大细胞、生殖细胞、黑色素细胞、Cajal间质细胞（ICCs）等，KIT与其配体，干细胞因子（SCF）结合后，对上述细胞的分裂、增殖、分化以及功能维持等具有重要调控作用。在胃肠壁内，除肥大细胞外，KIT主要存在ICCs，参与胃肠运动功能的调节，但胃肠黏膜上皮表达大量KIT的生物学意义尚不清楚。因此，本研究利用野生型C57/BL6小鼠（WT），c-kit基因功能缺失性点突变杂合子小鼠（Wadsm/+）和纯合子小鼠（Wadsm/m），经RT-PCR、免疫荧光染色和Western blot检测肠黏膜上皮细胞KIT的表达；BrdU掺入实验研究肠黏膜上皮细胞更新，探讨KIT受体信号分子在肠黏膜上皮细胞更新中的作用；应用酒精灌肠制作结肠黏膜损伤模型，结合BrdU掺入和HE染色等，比较野生型和杂合子小鼠结肠黏膜损伤修复差异，分析KIT信号分子在肠黏膜上皮损伤修复中的作用，为临床相关疾病的治疗提供新的实验依据。主要结果①肠黏膜上皮存在大量KIT阳性细胞，主要分布在肠隐窝的中下部，随肠黏膜上皮细胞分化成熟，KIT表达逐渐减弱至消失。②三组小鼠结肠黏膜形态无明显差异，隐窝的深度相近。③腹腔注射BrdU后，三种小鼠结肠黏膜上皮内均可见BrdU阳性细胞，主要位于隐窝中下段，但杂合子和纯合子小鼠BrdU阳性细胞数量较野生型小鼠明显减少。④酒精灌肠损伤结肠黏膜后，结肠隐窝塌陷，上皮完整性被破坏，黏膜固有层可见大量炎性细胞浸润，在杂合子小鼠肠黏膜损伤尤为严重；腹腔注射BrdU，24 h后野生型小鼠可见结肠隐窝部出现KIT和BrdU双标阳性的细胞，亦可见少量仅表达KIT或BrdU的细胞；而杂合子小鼠双标细胞数量较野生型小鼠明显少，提示肠黏膜上皮表达KIT与肠上皮更新有关，KIT表达减少或缺如，肠上皮更新和炎性损伤修复明显减慢。