水通道蛋白具有高效的水透过性和高度专一性,有望形成以水通道蛋白为基础的新型水过滤系统。在无细胞体系实现AqpZ 的高效和可溶性表达。在Brij78条件下,得到530 mg/l 可溶性AqpZ。在无细胞体系中添加DOPC脂质体,发现AqpZ自动定位到脂质体的磷脂层。AqpZ可溶表达水平最高可达470 mg/l。信号肽对 AqpZ 表达有显著的促进作用。与MBP等融合表达,可降低胞内表达引起的细胞毒性。经酶切和亲和层析可得到高纯度AqpZ。对新型水通道蛋白Aqp SS9进行了克隆表达和性能研究。在固体支撑膜的制备方面,以聚二甲基硅油(PDMS)磺酸酯为引发剂进行2-甲基-2-噁唑啉阳离子开环聚合,合成了分子量约为9680 g/mol、多分散系数为1.6 的双亲性ABA型三嵌段共聚物聚甲基噁唑啉- 聚二甲基硅油- 聚甲基噁唑啉(PMOXA24-PDMS74-PMOXA24),并通过融合法使其在高亲水性的云母、硅片表面沉积形成固体支撑膜。利用多孔硅和纳米孔氧化铝作基底制备了支撑磷脂膜。同时,为进一步进行水通道蛋白的整合,研究了AqpZ与磷脂DOPC和聚合物间的相互作用及离子条件对其的影响。
英文主题词Aquaporin;soluble expression;cell-free system;biomimetic membrane