中文摘要：

基因组印迹异常与多种疾病相关，并且是某些恶性肿瘤重要的分子生物学特征。基因的印迹状态由一类特殊的顺式元件- - 隔离子及其反式作用因子CTCF 和BORIS调节。本项目拟构建含CTCF融合蛋白的诱饵重组质粒，应用酵母双杂交系统从正常人肝cDNA 文库中筛选出与CTCF相互作用的因子，应用凝胶阻滞实验进一步筛选参与CTCF结合IGF2/H19隔离子的相关因子，并在肝癌细胞模型中研究CTCF及其相关蛋白逆转IGF2基因印迹由单等位向双等位基因表达的作用。初步揭示肝癌IGF2基因印迹由单等位向双等位基因表达逆转的机理。研究所获的调控IGF2基因印迹的CTCF相互作用因子，经进一步研究其在人肝癌中状态的变化，可能成为肝癌早期诊断和外科手术后肝癌复发的分子标志物，通过导入此蛋白因子的基因，逆转IGF2基因印迹和细胞表型，使之可能成为基因治疗的侯选基因，因此具有重要的理论意义和应用前景。

结论摘要：

基因组印迹是指亲代特异等位基因沉默。近年来基因组印迹作为一种表观遗传学现象在肿瘤发生中的作用逐渐受到重视。本项目对39例HCC组织和5例人肝癌或胚肝细胞系，及7例正常肝组织IGF2/H19基因印迹，调控序列H19DMR甲基化状态进行了研究，发现HCC中，47.1%（8/17）IGF2印迹获得，21.7%（5/23）H19印迹丢失，46.2%存在IGF2和H19至少一种基因印迹异常，70%HCC的H19DMR甲基化状态显示异常低或高甲基化，其与IGF2和H19的异常印迹相关（(P<0.003）；以CTCF为诱饵蛋白，采用酵母双杂交系统筛选人肝cDNA酵母文库，成功获得包括vigilin在内的与CTCF相互作用的5个候选基因克隆；采取分段克隆策略，克隆了含14个KH的RNA结合蛋白vigilin的全序列cDNA（编码1289氨基酸）及8个功能区片段；制备了vigilin的N端多克隆抗体，经鉴定抗体可特异识别人vigilin。研究成果为研究和阐明HCC发生中IGF2和H19印迹调控机制提供了重要线索并奠定了基础。