中文摘要：

EP0蛋白是PRV早期基因的产物，主要发挥转录激活功能，激活病毒其它基因的表达，这种功能性的蛋白为何会包装进成熟的病毒粒子中？它定位于病毒粒子的何种部位？这种定位有何功能？这些目前都不清楚。对EP0结构域的研究表明，该蛋白中存在与锌指结构类似的环指结构域，是结合DNA、RNA及蛋白质-蛋白质相互作用的区域，但实际上EP0并不结合DNA、RNA，因此它可能在蛋白质-蛋白质相互作用方面具有重要作用。以前的研究表明，EP0至少可与6种宿主细胞核蛋白发生相互作用,但EP0蛋白与PRV病毒粒子中其它蛋白是否存在相互作用尚未见报道。本研究拟通过免疫电镜观察及Western-blot研究EP0蛋白在PRV病毒粒子中的定位；通过pull-down试验找出与EP0可能存在相互作用的蛋白；通过免疫共沉淀试验验证EP0与这些蛋白的相互作用。研究结果对阐明EP0蛋白在病毒粒子中的功能具有重要意义。

结论摘要：

EP0蛋白是PRV早期基因的产物，主要发挥转录激活功能，激活病毒其它基因的表达。现有研究表明，该蛋白存在于成熟的病毒粒子中，但它定位于病毒粒子的何种部位？它与病毒粒子中其他蛋白是否存在相互作用？这些都不清楚。为了研究PRV EP0蛋白在病毒粒子中的定位，本研究在大肠杆菌中表达了该蛋白，通过杂交瘤技术成功制备了针对该蛋白的单克隆抗体，确定了该抗体识别的抗原肽及评价了其与天然蛋白的反应性，结果显示该抗体与病毒感染细胞中的天然蛋白反应，与纯化的病毒粒子中的EP0蛋白不反应；基于上述原因，我们制备了抗PRV EP0蛋白的多克隆抗体，用该抗体与胰酶处理的病毒粒子进行孵育，通过Western-blot检测其反应性，结果表明该抗体与未处理的病毒粒子反应，而与胰酶处理的病毒粒子不反应，因此确定PRV EP0蛋白可能位于病毒粒子的囊膜表面，但该结果与前人研究结果不一致，仍需进一步确证。为了研究PRV EP0蛋白与病毒粒子蛋白的相互作用，将EP0与GST在大肠杆菌中进行融合表达，采用谷胱甘肽琼脂糖珠纯化GST-EP0融合蛋白，然后与Triton X-100处理的病毒粒子蛋白进行作用，通过GST Pull-down实验筛选到3种可能与EP0存在相互作用的病毒粒子蛋白，经生物质谱鉴定这3种蛋白分别是PRV VP5，VP13/14，EP0蛋白。用Protein A+G Agarose结合EP0蛋白单抗，然后与PRV感染不同时期的细胞总蛋白进行孵育，通过免疫共沉淀（Co-IP）确定EP0可结合PRV VP5，VP13/14。为了进一步验证其是否存在直接的相互作用，将纯化的PRV病毒粒子经SDS-PAGE电泳后，通过Far wesren blot检测发现EP0可与PRV VP5，VP13/14及EP0蛋白本身发生结合，表明它们之间确实存在相互作用。