中文摘要：

皮肤衰老是最常见的衰老现象，抗皮肤衰老是医学研究的重要领域。营卫生于内而布达于外，在生理和病理上与皮肤有直接关系。作者提出"营卫不足是皮肤衰老的重要物质基础，补益营卫是延缓皮肤衰老的重要手段之一"的新观点。通过补益营卫延缓皮肤衰老的研究亦未见他人报道。作者通过动物实验研究发现补益营卫方药具有清除自由基，抗脂质过氧化；增加衰老皮肤胶原含量和改善衰老皮肤形态学的作用。本实验拟通过细胞衰老模型，利用细胞培养，免疫组化及蛋白组学等研究方法，继续观察补益营卫对衰老皮肤成纤维细胞增殖和胶原蛋白代谢的TGF-β1/Smads信号转导途径的影响，更进一步揭示补益营卫延缓皮肤衰老的科学内涵。

结论摘要：

本研究通过细胞培养复制人皮肤成纤维细胞衰老模型，依据该模型，利用免疫细胞化学技术、RT-PCR和western blot等多种方法，研究了补益营卫方对衰老人皮肤成纤维细胞增殖和TGF-β1/Smads信号转导途径相关蛋白基因表达的影响。结果显示，衰老时细胞增殖能力下降，合成DNA的水平下降，此表达水平下降与PCNA、C-fos、C-myc等因子的表达下降相关。在对TGF-β1/Smads信号途径的影响中发现，与年轻人皮肤成纤维细胞相比，24h、48h和72h内，衰老细胞的TGF-β1、CollagenI、Smad7和bFGF基因表达降低；TIMP1、MMP1、Smad4基因表达增强。补益营卫方药处理后，相对于衰老人皮肤成纤维细胞，24h、48h和72h内，bFGF、TβII、TIMP1、Smad3、Smad4、CollagenIII和TGF-β1基因的表达被明显上调。蛋白水平的研究显示与衰老人皮肤成纤维细胞相比，补益营卫药物血清处理促进TβI和TβII蛋白的表达；下调了bFGF蛋白的表达。中和TGF-β1蛋白后发现，与年轻人皮肤成纤维细胞相比，24h、48h和72h内，衰老细胞的TβI、TβII、CollagenI基因表达降低；TIMP1、MMP1、Smad3和Smad4基因表达增强。补益营卫方药处理后，相对于衰老人皮肤成纤维细胞，24h、48h和72h内，TGF-β1、TβII、Smad3、Smad7和CollagenI基因表达增强；bFGF、MMP1、Smad2、Smad4和CollagenIII基因的表达被抑制。当中和TGF-β1和bFGF蛋白后，Smad4基因表达增强。补益营卫方药处理后，相对于衰老人皮肤成纤维细胞，24h、48h和72h内，TGF-β1和Smad3基因的表达被上调。蛋白水平的研究显示中和TGF-β1或中和TGF-β1与bFGF蛋白后，bFGF蛋白的表达下降。综上所述，可以看出，①补益营卫方药能够通过促进衰老人皮肤成纤维细胞的增殖；②补益营卫方能够促进衰老TGF-β1基因的表达；③bFGF是TGF-β1信号途径的下游信号分子；④补益营卫方始终促进Smad4基因表达；⑤补益营卫方延缓皮肤衰老的机制与TGF-β1/Smads信号途径密切相关；其作用机制还与其它信号途径相关。