本研究以世代短,无论扦插苗或实生苗仅需一年即可开花的簸箕柳为材料,采用PCR技术分离与克隆控制花瓣和雄蕊发育的柳树AP3同源基因SsMADS,将其双链RNA导入簸箕柳,并通过研究转基因植株花器官表型变异以及采用RT-PCR分析RNA干扰前后SsMADS基因表达水平差异,从而研究该基因在簸箕柳花器官发育过程中的表达。同草本植物相比,木本植物花器官的形成发育机理研究甚少,极需加强。本研究不仅从理论上对
用RACE方法从簸箕柳雄花序中克隆了AP3同源基因SsMADS,长826bp,包括编码区、5'-UTR和3'-UTR,7个外显子和6内含子,编码区长723bp,编码241个氨基酸,其N-端具有典型的MADS保守结构域。SsMADS的氨基酸序列与毛果杨AP3同源蛋白有95.7%相似性,与其他几种柳属植物的AP3同源蛋白相似性达96.1%~99.6%。实时定量RT-PCR表明,SsMADS在叶、茎和根中表达量极低,在花序中表达量较高,并且其表达量在花器官的早中期发育阶段逐步提高,说明该基因在簸箕柳花器官的发育中起作用;用PCR扩增SsMADS基因保守和非保守区域,分别构建了SsMADS双RNA植物表达载体pBSRNAi和pFBSRNAi;以簸箕柳春季萌生的新枝条为外植体,建立植株再生体系。探讨了基本培养基和不同组合的激素对芽诱导的影响,结果表明基本培养基影响不大,而BA为1.0mg/L、NAA为0.01mg/L时,芽诱导率达100%;平均诱导芽数为3个/株;芽生长状况较好。当芽长到约3cm,切下,在不加激素的White或B5两种基本培养基中生根率达90%以上。