中文摘要：

As2O3能使部分多种治疗方法均无效的晚期实体瘤患者得到缓解，但其对肿瘤血管生成作用的不确定性和毒副作用过强，妨碍了其在临床的应用，采用As2O3节拍性化疗可能弥补其不足。本课题拟对As2O3节拍性化疗在肝癌治疗中的可行性及其联合抗血管生成的基因治疗方案的有效性进行研究和探讨。Canstatin是一种新发现的血管生成抑制因子，在抗血管生成的基因治疗上具有良好的应用前景。本课题通过构建Canstatin基因真核细胞表达载体，采用体内外实验研究As2O3节拍性化疗与抗血管生成的基因治疗对抑制肝癌血管生成、血管生成拟态形成及实体肿瘤生长的相关性，探讨As2O3节拍性化疗、Canstatin基因治疗肝癌的效应，以及As2O3节拍性化疗和Canstatin基因治疗联合应用治疗肝癌的可行性、有效性及其相关的分子机制，为肝癌的联合治疗方案提供实验基础和理论依据，进而为肝癌复发和转移的防治提供新的方法。

结论摘要：

课题通过As2O3节拍化疗、canstatin基因治疗及二者联合方式干预人肝癌HepG2细胞、人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、肿瘤血管内皮细胞（Td-EC）、裸鼠HepG2细胞移植瘤，探讨三种不同干预方法对细胞生物学（增殖、迁移、侵袭、凋亡、血管形成能力等）的影响以及对裸鼠一般状态、肿瘤生长及肿瘤血管形成的影响，分析探讨干预因素对肝癌治疗的有效性及可能的分子机制，为As2O3节拍化疗及联合方案治疗肝癌提供实验基础和理论依据。一、构建canstatin基因分泌型表达重组质粒pcDNA3.1(-)-3flag-canstatin，并成功转染HepG2细胞。获得重组腺病毒Ad-canstatin-GFP，转染HepG2细胞得到canstatin高表达。二、以HepG2细胞、HUVEC、Td-EC为研究对象1.检测细胞增殖、侵袭、迁移的改变；2.Matrigel胶三维培养法观察VM形成情况；3.RT检测细胞中VE-cadherin、MMP2、Caspase3及PCNA等因子的表达；4.流式细胞术检测细胞凋亡情况。三、以裸鼠移植瘤模型为对象，观察裸鼠一般状况，测量瘤体重和体积、行常规病检，CD117-FITC、Flk-1-PE、Sca-1-PE-Cy5等抗体标记外周血内皮祖细胞（CEPs），流式细胞仪计数，CD31法检测瘤体内MVD，用HE、过碘酸-雪夫反应染色计数VM数及VMD；检测瘤组织内VEGF、FLK-1蛋白表达。结果小剂量As2O3抑制HepG2细胞增殖，粘附，迁移，侵袭和血管生成拟态形成能力，可能与As2O3抑制PCNA、VE-cadherin、MMp-2的表达有关；Canstatin蛋白有促进其凋亡和抑制其增殖作用；As2O3与Canstatin联合对上述细胞生物学行为没有更明显作用。三种干预因素均促进HUVEC、Td-EC凋亡、抑制细胞成活能力、血管形成及迁移能力，且以联合方式作用最强；Td-EC对干预因素的敏感性高于HUVEC。As2O3节拍化疗对移植瘤的生长，瘤内血管形成能力（CEPs、MVD、VMD）有抑制作用，且明显强于传统化疗组，并以1.0mg/kgAs2O3组的抑制作用最为明显。三种干预因素对皮下移植瘤的生长，瘤内血管形成能力（MVD、VMD）均有抑制作用，且以联合方案作用最强，这可能与联合方案能更有效的抑制VEGF/FLK-1表达有关