中文摘要：

本项目的主要研究内容包括水牛体细胞核移植方法的改进，不同培养处理的供体细胞基因甲基化和组蛋白乙酰化水平测定，不同核移植方法构建所得克隆胚胎的基因甲基化和组蛋白乙酰化水平测定，水牛克隆胚胎的rRNA基因激活时间分析等。通过这些研究，将加深对水牛体细胞核移植再程序化机理的认识，找出水牛克隆胚胎正常发育的关键基因，建立一套有效的水牛体细胞核移植技术程序，为提高水牛体细胞核移植的效率和成功获得体细胞克隆水牛奠定理论和技术基础。

结论摘要：

本项目围绕水牛体细胞克隆的相关技术环节，对水牛克隆的受体卵母细胞体外成熟，供体细胞的培养处理及其DNA甲基化和组蛋白乙酰化水平测定，以及核移植效率的相关影响因素进行了系统研究。初步弄清了水牛卵母细胞成熟过程中的皮质颗粒变化规律以及颗粒细胞凋亡情况与成熟率之间的关系，发现上皮细胞生长因子和胰岛素样生长因子I均可降低水牛卵母细胞在体外成熟过程中的凋亡率、提高成熟率，建立了无卵丘卵母细胞的体外成熟方法；克隆了水牛的转移酶1（HAT1），去乙酰化酶1（HDAC1）和组蛋白H2A基因片段，初步建立了克隆胚胎DNA甲基化和组蛋白乙酰化的检测方法，弄清了供体细胞的DNA甲基化水平和组蛋白乙酰化水平与水牛体细胞核移植效果的关系，发现用去乙酰化酶抑制剂Trichostatin A和DNA甲基化转移酶抑制剂5-aza-2`-deoxycytidine处理供体细胞可提高其核移植效率；通过受体卵母细胞成熟和去核方法、供体细胞培养处理方法及融合方法的优化，建立了一套较为完善的水牛体细胞核移植程序，获得了世界首批体细胞克隆水牛（6头）。发表论文10篇，获得专利1项，培养博士2名、硕士4名。