中文摘要：

microRNA(miRNA) 是近年来相继在动植物和病毒中发现的一类特殊的非编码单链小RNA分子，它们在多种基因沉默途径中起着关键性的调控作用。本项目在前期研究基础上用原位杂交技术对bmo-let-7等重要miRNAs在家蚕发育过中的重要组织和器官如（卵巢、精巢中、丝腺和中肠等）进行定位研究；通过平行表达实验初步筛出let-7 miRNA的部分靶基因，通过核酸酶保护和双载体共转染等技术证明miRNA与靶基因的结合位点；主要通过构建miRNA上调和下调表达载体，同时使用合成的miRNA功能研究用的探针，研究let-7 miRNA在家蚕个体发育和丝腺器官发育以及在丝蛋白合成中的生物学作用；通过蜕皮激素和保幼激素诱导，初步探索以let-7 miRNA调节与激素调节在家蚕丝腺发育和丝蛋白合成中可能的联动关系。

结论摘要：

家蚕是具有重大经济价值的资源昆虫，也是农林害虫的重要模式昆虫，对家蚕miRNA调控功能的研究不仅具有重大理论意义，也具有重要的应用价值。在本课题资助下，我们开展了家蚕let-7 和其他相关miRNA功能研究，完善了研究平台，拓展了研究方向。 1．完善了家蚕miRNA的研究平台，包括miRNA和靶基因检测、miRNA敲除和过表达等技术。总结了检测家蚕miRNA的Northern杂交技术流程的特点及操作中须重视的环节。所述内容具有很强的可操作性和实用性，可供研究人员检测家蚕miRNA和其他小RNA。部分内容发表《蚕业科学》2014,40(4):0724-0729。 2．研究了let-7对家蚕变态发育的调控机理。在家蚕幼龄眠期上调let-7时，家蚕不能蜕皮，发育停滞。在预蛹期let-7上调时，阻断化蛹。bmo-let-7在Ras1、Ras2和Ras3的3’UTR上有靶位点。表达实验表明Ras2和Ras3可能是bmo-let-7的靶基因。双荧光素酶报告基因载体与let-7 mimics共转染证明Ras23’UTR有let-7靶位点。构建了miRNA过表达载体，在家蚕细胞和体内上调了let-7和其他一些miRNA。通过基因组编辑技术，在家蚕体内敲除了let-7和其他一些miRNA。部分见刘立会硕士毕业论文（西南大学2012）。为积累数据，暂未发表。 3．研究了bmo-miR-1的功能。上调miR-1时，家蚕蜕皮出现障碍。转录水平和蛋白水平的实验都表明BmChi受bmo-miR-1抑制。双荧光素酶共转染实验证明了BmChi是miR-1的靶基因。BmChi在蚕体旧表皮几丁质的降解过程中发挥重要作用。本部分见高颂的博士毕业论文（西南大学2012）。发表一篇核心期刊，《蚕业科学》2012，38( 3) : 0418－0423。为积累实验数据，关键数据还未发表。 4．基于前期研究，对家蚕let-7和其他microRNA的研究进行了系统全面地总结。见夏庆友、向仲怀主编《蚕的基因组》第11章家蚕小RNA，科学出版社2013年第一版。 5．作为miRNA研究方法的系统学习和运用，揭示了吸血蚊子特有miRNA 1174的重大生物学功能，发现其通过靶基因SHMT控制蚊子吸血和血液消化等。以第一作者发表了主要研究结果，PNAS:2014,111(40):14460-14465。