通过构建含热激蛋白质(hsp70)启动子的家蚕转座载体,从家蚕脂肪体与翅原基的4000个EST克隆中筛选重要的发育候选基因序列,用PCR或人工合成的方法构建含目的基因mRNA片段的IR(inverted-repeat)基因,重组到家蚕转座子载体中。利用显微注射系统将重组的转座子载体导入蚕胚胎或蚕体中,用热激诱导控制在蚕体内表达双链RNA达到干扰靶基因表达的目的。通过RNA干扰技术抑制家蚕变态期脂肪体及翅原基发育相关基因的表达,分析与变态期脂肪体及翅原基组织功能转变、组织解离、细胞凋亡、组织分化及组织形成等相关的重要发育基因功能,从基因水平阐明家蚕变态期脂肪体及翅原基的组织形态与功能变化的机理。通过同时导入一个或多个重组转座子载体的方法,获得可稳定遗传的单基因或多基因家蚕突变体,为开展家蚕功能基因组研究提供一种快速、有效的技术平台。
通过从家蚕脂肪体与翅原基中筛选并克隆重要的发育候选基因序列,利用RNA干扰技术抑制家蚕变态期脂肪体及翅原基发育相关基因的表达,分析与变态相关的重要发育基因功能,从基因水平阐明家蚕变态期脂肪体及翅原基的组织形态与功能变化的机理。通过对家蚕脂肪体及翅原基基因表达谱的分析, 首次克隆了具有重要生理功能的新基因20个;系统地研究了一批新基因如调控细胞内基因表达的核酸结合蛋白质- - 家蚕锌指结构蛋白细胞调控因子(BmZFP)基因、调控细胞内蛋白质降解功能的- - 家蚕泛素结合酶(BmUCE2I)基因、在组织和细胞内能量代谢、储存和利用起关键的调节作用的- - 家蚕精氨酸激酶(BmAK)基因等,对这些基因的cDNA全长、基因组结构,启动子序列、外显子序列、内含子序列、氨基酸序列功能结构域、各种转录因子识别和结合位点、基因在不同组织和不同发育时期的表达特征等进行了全面系统的研究,阐明了这些基因对家蚕脂肪体及翅原基组织形态与功能变化的作用规律;构建了一个的能同时导入一个或多个重组基因的PiggyBac转座子载体,获得可稳定遗传的单基因或多基因家蚕突变体,为开展家蚕功能基因组研究提供了一种快速、有效的技术平台。