本研究的目的是通过精确调控MSTN表达来研究该基因在小鼠不同发育阶段肌肉生长发育中的影响。本研究拟将MSTN小RNA干扰序列、MSTN cDNA片段分别连接到诱导型TRE-CMV启动子下游,构建相应慢病毒载体并包装慢病毒,经显微注射法制备转基因小鼠;最终分别得到可调控型MSTN基因沉默及MSTN过表达的转基因小鼠近交系纯合子。不同妊娠阶段及出生后不同阶段的转基因小鼠经强力霉素诱导MSTN基因沉默、基因过表达后,测定肌肉生长发育相关基因的表达水平。本研究有助于了解MSTN在肌肉生长发育中发挥效应的时间节点及可能的调控通路,为探讨该基因在家畜生产中的应用及治疗肌肉萎缩病方面提供理论依据。
Myostatin;shRNA;Gene silencing;controlled expression;
肌肉生长抑制素( MSTN)是一个骨骼肌生长发育的负调控因子。本研究的目的是通过精确调控 MSTN表达来研究该基因对小鼠肌肉生长发育中的影响。本研究首先设计出4条不同的MSTN shRNA,检测各自表达效率,选取干扰效率最高的构建整合型可控表达MSTN shRNA,在细胞水平验证其表达效率和诱导效率后,利用显微注射法制备可控表达MSTN shRNA转基因小鼠,对转基因小鼠进行检测后,繁育出F1代转基因小鼠,开展12周强力霉素诱导实验,对转基因小鼠窝产仔鼠数、仔鼠存活率及1月龄出生体重等进行了检测和评估,MSTN在诱导后转基因小鼠体重增加速度超过其他各组,而其他观察的指标正常小鼠无显著差异。本研究初步说明通过后天控制MSTN表达可以实现在对繁育效率无显著影响的前提下促进机体发育。本研究有助于了解MSTN在肌肉生长发育中发挥效应的时间节点,为探讨该基因在家畜生产中的应用及治疗肌肉萎缩病方面提供理论依据。