真核生物染色质分为常染色质和异染色质,异染色区域基因沉默是目前研究的热点。酿酒酵母遗传背景清楚,便于进行基因沉默的研究,迄今为止HM区域基因沉默研究最多,该区域两侧的沉默子形成,延伸,维持基因沉默。沉默子由原沉默子ORC,Abf1,Rap1结合位点中两个或三个组成。本研究前期工作表明,原沉默子单独存在虽无法形成基因沉默,但是与沉默子相互作用下,Abf1和ORC结合位点能够在其两侧形成基因沉默,而Rap1结合位点只在与沉默子相互作用侧形成基因沉默,而在其另外一侧无法形成基因沉默,改变Rap1位置基因沉默消失,Abf1结合位点单独存在2或3个拷贝数均形成基因沉默。本研究计划分别采用DNA拓扑结构法、MNase不完全降解结合Southern blot法、CHIP、3C对染色质螺旋度、核小体排列、组蛋白修饰、空间距离等染色质结构的角度对基因沉默的机制进行研究并解释。
英文主题词gene silencing;protosilencer;heterochromatin;cell cycle;chromosome conformation capture