中文摘要：

为获得具有降解纤维素能力的基因工程改造乳酸菌，进而解决瘤胃纤维降解菌耐酸性差的问题，本研究利用现代分子生物学技术对康宁木霉AS3.2774纤维素酶CBHⅡ基因进行了克隆与表达。试验包括三部分（1）AS3.2774菌种的恢复培养与诱导培养。（2）AS3.2774 CBHⅡ的克隆与测序。（3）AS3.2774 CBHⅡ的表达与检测。结果（1）AS3.2774经过5天的PDA恢复培养，菌体生长旺盛，能形成大量分生孢子，菌落呈深绿色。Mendels诱导培养中，菌体以松散的菌丝体形态存在，诱导剂微晶纤维素能够诱导康宁木霉AS3.2774 CBHⅡ基因的mRNA表达。（2）成功克隆AS3.2774 CBHⅡ的CDNA全长，开放阅读框（ORF）长度为1413bp，编码470个氨基酸，推测的蛋白分子量为49.6KD。（3）实验成功构建了重组表达载体pW425t-CBHⅡ，SDS-PAGE分析，在大肠杆菌和乳酸杆菌种进行表达可见约49.6kd的蛋白。经刚果红染色显示，大肠杆菌转基因工程菌和乳酸杆菌转基因工程菌两种基因工程菌均可产生明显的水解圈；并且在温度50℃，两种基因工程菌的酶活力最高。