马铃薯卷叶病毒(PLRV)侵染某些马铃薯品种时会引起顶叶红化现象,这是花色苷非正常合成和积累的结果。利用RT-PCR方法,以保守序列为引物,从有明显PLRV侵染症状的马铃薯中克隆到长度为5882bp的PLRV基因组序列,为了研究基因组的转录活性,构建了3个PLRV基因组表达载体,用农杆菌侵染法进行遗传转化,其中获得的Desiree转化体中有2株叶片发生了明显变化,叶片卷曲,表现出顶叶红化现象,同时检测到与PLRV基因组相融合的GFP在叶片中表达时所产生的绿色荧光。根据PLRV全基因组序列分别设计ORF0、ORF1、ORF2、ORF3、ORF4、ORF5的特异引物,克隆到6个ORF,分别构建表达载体,用农杆菌侵染法筛选到了各个ORF序列的转化体,尽管在转化体的叶片中也检测到了与各个ORF序列相融合的GFP表达时产生的绿色荧光点,但植株和叶片颜色无明显变化,没有表现出顶叶红化现象和明显卷叶现象;这说明单个ORF的表达可能不足以引起马铃薯花色苷的生物合成和积累,因此,PLRV侵染激活花色苷生物合成可能涉及到多个ORF的表达和相互作用。此外,还研究了花色苷合成相关基因的表达及其他相关内容。
英文主题词potato leaf-roll virus;anthocyanins;gene cloning;genetic transformation; expression analysis.