中文摘要：

本研究利用出生羔羊或胎儿的小肠上皮组织，进行体外人工贴壁培养，获得传代的不同代数的小肠上皮细胞，确定培养、传代、冷冻保存条件、冻存细胞的复苏条件、微生物污染的判断预防和排除，建立反刍动物山羊的小肠上皮细胞库模型。利用获得的不同代数的小肠上皮细胞对氮素利用情况进行研究，探讨山羊小肠上皮细胞对氨氮、尿素及氨基酸氮等不同形式氮源的细胞水平上的利用和转化，同时对细胞核、细胞质的形态变化及其微观结构变化进行

结论摘要：

本研究利用新生山羊的小肠上皮组织块，进行体外人工贴壁培养，可以获得传代12代的小肠上皮细胞（IEC）系。新生山羊IEC的最适培养条件10%FBS、2mmol/mlGln、10ng/mlEGF和0.005mg/ml的胰岛素；分离培养的细胞经传代后，细胞形态呈明显而规则的多角形；采用免疫组化鉴定为阳性，其增殖能力较强；冷冻保存条件和复苏条件以冻存液Ⅰ，冻存方法Ⅲ为最好，IEC复苏后的贴壁率为85%；IEC经染色体核型分析，没有发现染色体异常，经传代的IEC细胞正常。鉴于上述，新生山羊小肠上皮细胞系可以冷冻保存达到传代12代的IEC，建库可行。同时，利用获得的6代和10代的IEC细胞,经过复苏，培养，初步研究了IEC对谷氨酰胺（Gln）、精氨酸（Arg）等营养素利用。结果表明，单一或同时添加Gln和Arg，影响IEC分泌碱性磷酸酶（AKP）和肌酸激酶（CK）活性，说明影响山羊IEC分化增殖。组氨酸、精氨酸、苏氨酸和亮氨酸是IEC快速利用的氨基酸，在72h内快速下降；天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸是生成的氨基酸，在72h内有所积累；其它氨基酸呈现平缓的被消耗状态。