中文摘要：

冠状动脉旁路移植术（CABG）是治疗冠心病最有效的方法之一，大隐静脉是冠脉旁路移植手术中最常用的血管桥，然而静脉血管移植物术后血管内膜增生导致再狭窄的原因及作用机制尚未完全阐明，并且针对这种再狭窄尚无理想的治疗措施,因此对其发生机制和治疗方案的研究十分必要。有研究研究显示Toll样受体（TLR）参与了动脉粥样硬化过程和血管损伤过程中的内膜增生，但具体作用和功能尚未可知。本研究通过大鼠冠状动脉旁路移植模型明确介导CABG术后静脉移植物内膜增生的TLR家族成员，以及TLRs的基因表达和静脉移植物内膜增生的相互关系；通过siRNA沉默TLR4基因抑制或减轻静脉移植物的内膜增生；同时探索静脉移植物内膜增生机制、VSMC增殖与迁移的机制，EnMT过程与内膜增生之间的关系。以期加深对冠脉旁路移植术后静脉移植物内膜增生机制的了解，并可能提供一种新颖、有效、可行的方法来预防冠脉旁路移植术后移植物再狭窄。

结论摘要：

冠状动脉粥样硬化性心脏病是导致人类死亡的主要原因。冠状动脉旁路移植术（CABG）是治疗严重冠心病最有效的方法之一。研究显示，静脉血管移植物的再狭窄是由于血管平滑肌细胞的增殖和迁移以及细胞外基质（ECM）沉积导致的血管内膜增生的结果。最近发现TLRs在动脉粥样硬化过程中具有潜在作用。研究TLR4在移植静脉及血管平滑肌细胞（VSMCs）病理生理功能之间的关系，可能为揭示颈静脉移植血管内膜增生的作用机制提供重要的实验基础及理论依据，为血管内膜增生的诊治及预后评估提供新的靶点。本研究利用RNA干扰技术研究TLR4在大鼠旁路移植术后移植静脉内膜增生中的作用，并用逆转录病毒转染技术研究TLR4配体Prx1对VSMCs细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。一、建立大鼠颈静脉移植模型，将其分为五组林格氏液组、对照siRNA组、TLR4 siRNA溶液组、TLR4 siRNA蛋白胶组、TLR4 siRNA溶液+蛋白胶组，其中TLR4 siRNA蛋白胶组是应用生物蛋白胶将质粒、脂质体及蛋白生物胶混合体均匀的喷洒于血管外膜周围，以达到持续释放药效的效果。对照组血管内膜在术后明显增生，而TLR4干扰组内膜增生不明显，且TLR4 siRNA溶液组比蛋白胶组干扰效果好，但没有蛋白胶干扰效果持续时间长，而TLR4 siRNA溶液+蛋白胶组在干扰效果及持续时间上均达到最佳。同时，TLR4干扰组显著抑制了炎性细胞因子及粘附分子的表达，证实TLR4在移植血管内膜增生中的作用及机制。二、检测到TLR4的配体Prx1在移植静脉中高表达，因此构建逆转录病毒介导的Prx1稳定过表达的VSMC细胞系，检测Prx1过表达对VSMC细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。检测结果显示，Prx1的过表达促进了VSMC细胞的增殖、侵袭及迁移能力。为了证实Prx1对TLR4的依赖性，构建TLR4干扰质粒及Prx1过表达质粒共转染的细胞组，检测VSMC细胞系的增殖及迁移能力。结果显示，TLR4干扰组能够有效的降低VSMC细胞的增殖及迁移能力。这不仅验证了Prx1在血管平滑肌细胞增殖、侵袭及迁移过程中的作用，更证实了TLR4受体与配体Prx1的相互作用，为下一步预测并验证TLR4/Prx1激活的信号通路奠定了基础。综上所述，TLR4/Prx1有望成为血管内膜增生诊断、治疗与预后评估的新靶点。