中文摘要：

低密度脂蛋白受体 (LDLR)基因突变导致家族性高胆固醇血症(FH)。FH患者是冠心病的主要危险人群，纯合子患者多于20岁前死于心肌梗塞。然传统治疗不仅无法根治FH且预后不佳，而现行的基因治疗方法又存在诸如宿主基因插入失活、癌基因激活和病毒组分免疫反应等严重危害。基因原位修复就是在基因突变部位纠正变异的碱基,彻底去除原始病因，疗效安全而持久。近年来基因原位修复取得明显进步，LDLR基因突变主要是单个或几个碱基的变异，理论上只要纠正变异的碱基就彻底去除了原始病因。本课题用修饰的单链寡核苷酸（MSO）原位修复LDLR基因点突变，有望为FH的根治带来希望的曙光。在此基础上建立的LDLR基因点突变疾病动物模型及评判基因修复效果的一系列方法也为其他遗传疾病的基因治疗研究提供有益的借鉴。

结论摘要：

家族性高胆固醇血症（FH）的致病基因是低密度脂蛋白受体（LDLR）基因，大多为点突变，属公认的遗传性疾病基因治疗的首选病种。现行基因治疗方法在安全性和持久性方面尚有不少问题。新近报道的对点突变进行染色体原位修复是一种全新的理念, 具有诱人的发展空间。本项目组利用定点诱变技术制备LDLR基因无义突变（660）分子，并重组到慢病毒载体，再将重组的慢病毒载体稳定转染Hela细胞和腹腔注射LDLR基因敲除型小鼠，以分别制备LDLR基因660突变的细胞和动物模型，然后用修饰的单链寡核苷酸（MSO）原位修复LDLR基因点突变。经鉴定，LDLR基因660突变的细胞和动物模型实用可行；经细胞基因修复实验，设计、筛选出较理想的MSO；经腹腔注射野生型LDLR基因，LDLR基因敲除型小鼠的低密度脂蛋白和总胆固醇明显降低；经尾静脉注射特异的MSO，LDLR基因660突变模型动物的低密度脂蛋白和总胆固醇无明显降低，也未检测到基因修复。