中文摘要：

本课题通过多克隆位点质粒介导转染wnt3A,smad4方法和自然衍发基质（NOM）培养技术，使骨髓基质干细胞（MSCs）具备胚胎Spemann期基因表达特性；用激光共聚焦显微镜观察MSCs的Wnt和Smads通路聚合现象，以Microarray和QT-PCR技术观察其基因谱变化。并联合逆转录病毒介导的osteoprotegerin（OPG）基因转染，使MSCs成为长期存活的wnt3A,smad4,

结论摘要：

背景转基因细胞在体内存活时间过短，不能缓持表达目的基因，是PMOP骨折基因治疗的瓶颈。研究显示miRNA可以微调基因的表达。前期工作证实了完全脱细胞羊膜（AAMM）在体外可培养MSCs3周/代。方向探讨spemann期基因信息作用下miRNA的变化和细胞内传导信号分子的分布，并检验AAMM诱导成骨的能力。内容和结果分离、培养、大鼠MSCs；流式细胞鉴定及生长曲线显示MSCs分离、生长良好。通过穿梭质粒、线性切割和包装构建rAD5-smad4；PCR鉴定构建结果满意。以rAD5-smad4转染和Wnt3a联合刺激培养MSCs,使MSCs可存活2周/代，凋亡率0.02%。microarry 发现hsa-miR-122、638、494表达上调。激光共聚焦显示完成β-cat/ Smad4聚合。AAMM在骨缺损区诱导大量的软骨细胞和血管生成，AAAM逐渐降解。结论在Wnt3A和smad4的共同作用下，MSCs高表达hsa-miR-638、494、450。AAMM可以作为诱导骨再生材料。意义为利用AAMM及spemann期miRNA微调、实时缓持表达目的基因诱导成骨过程，提供实验依据。