中文摘要：

本课题将耐药基因转染至NK细胞内，研究转基因NK细胞的耐药性及抗肿瘤效应。拟应用Amaxa nucleofection systemk技术将EGFP与耐药基因(MGMT ，ALDH1、ALDH3)重组质粒导入NK细胞内并有效的表达，使其细胞具有耐药性，能抵抗化疗药物对其本身的细胞毒作用并保留抗肿瘤效应，与化疗药物同步输入体内时可以获得更强的抗肿瘤效果, 该研究对于了解NK细胞的抗肿瘤细胞生物学特性

结论摘要：

采用RT-PCR 方法从人肝组织克隆了六氧甲基鸟嘌呤一DNA一甲基转移酶(MGMT)基因，经酶切及测序鉴定后插入构建真核表达载体，采用脂质体法导入K562,人骨髓及外周血造血干祖细胞，研究MGMT对转基因靶细胞的保护作用，同时构建腺病毒表达载体，制备高滴度的含耐药基因的腺病毒颗粒并与含增强荧光蛋白(EGFP)的真核表达栽体作对照，转染人CD34+细胞，采用RT-PCR,Wester Blot,MTT 等方法检测目的基因在靶细胞中mRNA,蛋白水平的表达及对靶药的耐药特性，结果显示MGMT基因的导入能增强靶细胞对烷化剂药物的抗性。细胞载体靶向治疗是目前的研究热点，与NK细胞相比，间充质干细胞更具感应肿瘤微环境发出信号，追踪肿瘤、传递基因的作用，本项目还研究了骨髓间充质干细胞（MSCs）Toll样受体4（TLR-4）的表达及体外脂多糖（LPS）对其功能性表达，克隆了化疗前药激活基因CYP2E1，构建制备含目的基因的重组腺病毒，导入间充质干细胞，研究并证实了转基因MSCs具有肿瘤靶向聚集的特性，在体内外均存在一定的协同化疗药物抗肿瘤效应。