中文摘要：

低毒靶向、直接杀伤肿瘤的中药有很好的临床应用前景，利用复方成分相互作用协同增效是提高其抗杀伤肿瘤效应的重要策略。已报道诱导M期阻滞(M-A)和M期滑移(M-S)的药物联合作用，对诱导细胞凋亡形成协同增效、增敏效应；而CDK1抑制剂可促进M-S发生，逆转M-S机制缺陷肿瘤细胞的耐药性。前期工作发现由黄连、吴茱萸、青黛组成的加味左金丸，能明显减少大鼠胃癌发生率，其主要成分吴茱萸碱能诱导癌细胞凋亡，且可能是不影响微管结构的特异纺锤体抑制剂，能诱导M-A，而靛玉红是已证实的CDK1抑制剂。因此，本研究拟探讨吴茱萸碱与靛玉红联合能否通过M-A与 M-S机制产生协同作用及分子机制；探讨改进型加味左金丸能否既获得原方调整肝脾不和改变肿瘤机体内环境之效用，又可获得M-A与M-S机制协同诱导凋亡的效应,从而比原方有更强抑瘤效果；探讨其主要药效成分组方的药效；为该方的改良增效及抗肿瘤临床应用提供依据和实验基础

结论摘要：

目标细胞水平明确①吴茱萸碱其是否特异的纺锤体拮抗剂，是否通过M-arrest(MA) 和M-slippage（MS)环节启动凋亡。②青黛的主要成分靛玉红已证实是CDK1抑制剂（CDK1I）。吴茱萸碱加入促MS的CDK1I能否协同性增强肿瘤细胞凋亡，与MA、MS的关系及协同机理如何。 动物水平探索由吴茱萸、黄连、青黛组成的改进型加味左金丸的抑癌药效，明确其是否比原方抗肿瘤疗效更好。结果1. 与紫杉醇近似，吴茱萸碱是纺锤体和有丝分裂抑制剂，能诱导BubR1表达从而激活纺锤体SAC检验点，使细胞阻滞于M期中期，即诱导了MA，其诱导凋亡是M期凋亡（有丝分裂灾变）。但药效低于紫杉醇数倍。不同肿瘤细胞株对吴茱萸碱敏感性不同，对几种低增殖细胞株及原代培养细胞的生长抑制很低，对高增殖肿瘤细胞抑制较强，说明吴茱萸碱对肿瘤细胞有选择性。2. 吴茱萸碱诱导M-凋亡需通过MA和MS两个相继环节。不同肿瘤细胞株MA、MS发生时间点不同，例如SGC7901等 MS时间点约在20-24h；HT29等MS时间点约27-30 h，较长时间才能发生MS，吴茱萸碱、紫杉醇诱导其凋亡效应也比SGC7901弱。3. 过表达全长的FL-CyclinB1和缺失降解盒的ND-CyclinB1抑制MS，使SGC7901等细胞的凋亡受抑制；用靛玉红等CDK1I可促进MS发生，在吴茱萸碱达到一定浓度时间后加入能明显协同提高一些细胞的凋亡率，但低浓度吴茱萸碱加入CDK1I，或反序贯加入均不能产生协同性；对HT29 等细胞，多种浓度CDK1I、正反序贯加药对各浓度吴茱萸碱、紫杉醇均没有协同性，甚至有拮抗性。 4. 吴茱萸联合青黛，序贯加药或同时加药对小鼠肝癌H22移植瘤均有一定抑制作用，效果优于单药，符合假说，与细胞水平结果较一致。加味左金丸以多种配比、加药方式对小鼠肝癌H22移植瘤大小均没有抑制作用；吴茱萸碱、靛玉红衍生物、小檗碱组成的组分复方，序贯或同时加药，体外对人肝癌细胞作用与各单药比是拮抗作用，与假说相反。意义证实吴茱萸碱是特异的有丝分裂纺锤体抑制剂，能诱导M-凋亡和通过MA和MS机制启动凋亡，探讨了吴茱萸碱与CDK1I联合通过MA与MS产生协同或拮抗作用及部分机制；证实改进型加味左金丸整体水平没有抗肿瘤效应,组方反而有消除单药细胞毒作用；为吴茱萸碱和加味左金丸的抗肿瘤及其他临床应用提供依据和实验基础