中文摘要：

慢性乙型肝炎（CHB）是一种难治性疾病, α干扰素和核苷类似物（NAs）抗病毒治疗是目前国际上公认的少数有效的治疗方法。NAs治疗有效、易行、安全，已成为抗病毒治疗的主流方法，但长期使用会产生耐药。目前CHB患者抗病毒治疗的NAs选择没有统一的标准，缺乏像指导临床抗生素应用的体外药敏实验系统。抗病毒药物的选择存在很大的盲目性，正是这种盲目性令NAs抗病毒耐药的管理非常困难。大量的临床结果显示，不同的病人对同一NAs的反应性不一样，同一病人对不同NAs反应也不同。越来越多的研究表明,NAs的不同反应性与HBV存在的准种现象有密切关系。因此，全面研究准种的特点具有非常重要的意义。本课题拟采用高通量的测序技术对准种进行大样本的检测，分析准种在不同NAs作用下的动力学变化，准种的模式组成、比例分布、进化规律等。从而找出具有预测价值的准种特征，建立基线预测的数学模型，更好的指导临床合理用药。

结论摘要：

慢性乙型肝炎（CHB）是一种难治性疾病,核苷类似物（NAs）治疗有效、安全，已成为抗病毒治疗的主流方法，但长期使用会产生耐药。研究表明,NAs的不同反应性与HBV存在的准种现象有密切关系。本课题采用高通量的测序技术对准种进行大样本的检测，分析准种在NAs作用下的动力学变化，准种的模式组成、比例分布、进化规律等。从而找出具有预测价值的准种特征，建立基线预测的数学模型，更好的指导临床合理用药。 首先，我们选择40例ADV治疗一年的CHB患者不同时间点DNA标本。PCR产物混匀进行454深度测序。然后，我们对原始序列进行处理，修正测序的错误。统计各个位点的碱基情况，计算香农熵，统计各个准种的情况，计算每个标本基因型的情况。统计并查看位点主要碱基的含量，找到了具有预测价值的11个位点，其预测准确率80%以上。 另外，我们对基因型转换问题进行了研究，选择38例ADV治疗一年的病例，用HBV短序列窗口分型方法对所测序列进行基因分型。Sanger测序结果显示，38例病人中有13例发生基因型转换，且主要是C型到B型的转换。而深度测序结果显示，所有发生基因型转换的标本在ADV治疗前已经是B和C型混合感染。进一步用Solexa深度测序对165例临床标本检测其混合感染的情况，结果混合感染比例也很高。进一步分析表明混合感染是基因型转换的基础，选择压力是基因型转换的条件，而不同基因型对药物反应性的差异是基因型转换的关键。