本课题采用现代海洋生物工程技术,在国际上率先自海洋贝类废弃物中提取、分离、纯化出具有抗氧化作用的创新海洋生物肽- - 扇贝多肽。通过建立UVA、UVB、模拟日光对角质形成细胞的氧化损伤模型,从信号传导通路的源头着手,探究扇贝多肽在保护受紫外线损伤的角质形成细胞时的最初作用靶点。应用流式细胞术、彗星电泳、高效液相色谱法、基因芯片技术和其它多种分子生物学方法,在国际上率先对UVA、UVB氧化损伤角质形成细胞的机理进行比较性研究,着重揭示扇贝多肽对不同紫外线损伤的角质形成细胞内的大量信号传导分子基因表达的影响。这将为该领域的相关研究提供理论依据,为海洋生物科学、预防医学、药学多学科领域交叉研究提供新思路,同时奠定海洋贝类综合利用的理论基础。
本课题采用现代海洋生物工程技术,提取、分离、纯化出海洋生物抗氧化活性肽- - 扇贝多肽,获得国家发明专利(专利号ZL 200510000032.2)。首次以cDNA基因表达谱芯片技术探究了UVA、UVB损伤人HaCaT角质形成细胞的基因表达谱变化,UVB照射后有176条基因表达改变,其中41条与细胞凋亡有关,占差异表达基因的23%;UVA照射后有1254条基因表达改变,其中145条与细胞凋亡有关,占差异表达基因的12%。首次以正交实验设计确立了UVA、UVB及模拟日光诱导HaCaT角质形成细胞凋亡模型,在国内外首次证明了UVA可引起HaCaT细胞中TRAIL表达增加,并提出TRAIL在UVA诱导HaCaT细胞凋亡中发挥重要作用;首次阐明紫外线引起HaCaT细胞凋亡通过ROS-JNK/p38-caspase-3通路。证明了扇贝多肽可增强HaCaT细胞的抗氧化能力,抑制细胞凋亡;扇贝多肽对HaCaT细胞的最初作用靶点在细胞膜,其保护紫外线损伤角质形成细胞作用机理是影响了紫外线照射后死亡受体/配体、MAPK、神经酰胺、NF-κB及线粒体等信号传导通路。