中文摘要：

肝癌的术后复发转移是制约其长期生存水平提高的关键因素。我们前期研究显示miR-140-5p在肝癌组织中呈显著低表达，过表达miR-140-5p能有效地抑制HCCLM3细胞系的侵袭转移能力。故我们推测miR-140-5p很可能具有较强的抑制肝癌侵袭转移的作用。为此，我们拟采用慢病毒介导的过表达技术、划痕实验、Transwell及裸鼠肝癌原位成瘤模型等进一步验证miR-140-5p在肝癌侵袭转移中的作用；继而采用生物信息学、蛋白芯片、荧光素酶报告基因筛选其靶基因并进行系统的体外、体内研究，以期阐明其作用的分子机制；最后构建糖基化修饰的聚乙烯亚胺（PEI）纳米颗粒介导的miR-140-5p靶向治疗系统，探讨其体内系统干预对肝癌侵袭转移能力的抑制作用。本研究预期将阐明miR-140-5p在肝癌复发转移中的作用及其机制，并为研制靶向miR-140-5p的肝癌复发转移治疗新药物奠定坚实的基础。

结论摘要：

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，特别是在中国。死亡率高居所有男性恶性肿瘤的第二位，女性恶性肿瘤的第六位。目前肝癌的总体疗效仍难以令人满意，其5年生存率长期徘徊于30％-40％，甚至更低。究其原因，肝癌术后发生的复发转移是影响肝癌长期生存的根本障碍所在。最新的研究显示 microRNA(miRNA)在这一过程中起着关键性的作用。因此，深入研究探索肝癌复发转移的分子机制，筛选与研发相关的关键干预靶点对于肝癌术后复发转移的防治具有十分重要的理论意义与实际价值。本研究以孤立性大肝癌(SLHCC)为切入点，比较不同复发转移潜能的孤立性大肝癌、小肝癌(SHCC)和结节性肝癌(NHCC)的miRNAs表达谱及其表达差异。我们在初步研究中发现miR-140-5p可能在肝癌的发生发展过程中发挥着重要作用。因此，本研究中我们以miR-140-5p作为研究目标，深入研究其在肝癌中的表达水平、生物学作用及其作用机制。本研究通过采用实时定量PCR检测了120例肝癌组织(HCC)及相应的癌旁非瘤肝组织(ANLT)中miR-140-5p的表达水平，发现在肝癌组织中miR-140-5p呈显著低表达(p<0.05)，而且其低表达与肝癌的临床病理特和肝癌的不良预后具有显著相关性(p<0.05)。检测六种肝癌细胞系中miR-140-5p的表达水平，同样发现其表达水平均明显低于正常肝细胞系L02(P<0.05)。通过划痕愈合、Transwell侵袭小室、MTT生长曲线、克隆形成和流式细胞仪检测细胞周期等一系列功能学实验证实miR-140-5p可在体外抑制肝癌细胞的侵袭转移和增殖能力。继之采用裸鼠原位成瘤模型在体内证实miR-140-5p可在体内同样发挥抑制肝癌细胞侵袭转移和增殖的作用。采用肿瘤多信号通路筛选、生物信息学预测、双荧光素酶报告基因系统、Western-blot、免疫组化(IHC)和一系列体外功能学实验方法证实TGFBR1和FGF9是miR-140—5p发挥生物学作用的直接靶基因。而且，进一步证实miR-140-5p与TGF B信号通路之间存在负反馈调节关系，且TGFBR1处于FGF9的上游。基于上述，我们首次发现miR-140—5p是通过靶向调节TGFBR1和FGF9抑制肝细胞癌增殖和侵袭转移。