针对目前生物技术,免疫工程中,对高纯度、高活性抗体的广泛需求,而色谱技术仅适合于诊断和小批量分离的特点,本课题,利用磁性微球技术开发一条高效、高纯度、高活性分离抗体的新方法。我们分别采用细乳液聚合技术和微悬浮聚合技术,制备了具有良好磁性的微球材料。通过二乙烯基砜活化,在磁性微球表面修饰嗜硫性配基。通过调整反应介质和优化反应工艺,嗜硫性配基在磁性微球表面的接枝率,可以达到1.67mmol/g,是常规方法的10倍。选择杂环型嗜硫性配基,磁性微球可以再生理环境中实现对血清中抗体的特异性识别,由此,可以实现对人血清中免疫球蛋白G(IgG)的高纯度分离。分离所得的产品,纯度均高于90%,优化工艺后,产品纯度达到98%。此方法,所采用的吸附、脱附环境非常温和,有效保持了抗体的生物活性,其活性普遍高于99%。而且,这种磁性微球技术,分离速度较快,所需设备简单,磁性微球的重复使用率较高,在规模化分离抗体方面表现出巨大的潜力。目前,在实验室中,可以实现一次性分离20 mL 血浆,分离产率达到81.8%。我们进一步分析了嗜硫性配基和抗体相互作用的基本机理,为嗜硫性配基的选择与合成提供了基本的理论指导。
英文主题词magnetic beads; thiophilic; immunoglobulin G; isolation; purification