中文摘要：

以往一直认为库存血的形态学和生化指标变化是输血引发局部组织供血不足和缺血再灌注损伤的原因。但即使输用新鲜血液也会出现上述情况，说明还存在另外的贮存损伤机制。据最近的文献报道和我们前期研究表明，血液在贮存过程中一氧化氮（NO）的迅速耗竭、丧失低氧性血管舒张的功能是其主要原因，对库存血重新亚硝基化可以恢复此功能，但该措施有悖于血液制备贮存的操作常规。为此，我们提出利用库存红细胞自身的一氧化氮合酶（RBC-NOS）合成NO。在现有的血液保养液中加入NO的合成底物L-精氨酸和NOS激动剂ATP并确定其剂量-效应关系。采用荧光免疫、免疫印迹、免疫共沉淀等技术方法研究RBC-NOS与RBC其他蛋白质之间的相互作用，阐明RBC-NOS合成NO的可能的信号通路，为后续的体内外功能试验奠定基础，为保持低氧性血管舒张功能的新型血液保养液的研制提供思路，为提高库存血质量和临床输血的安全性和有效性提供技术保障。

结论摘要：

观察了加入L-精氨酸后库存红细胞eNOS的磷酸化水平和血管舒张作用。悬浮红细胞被存储在4°C，分别在 0 d、 7 d、 14 d、 21 d、 28 d 和 35 d后进行测试。WB 和免疫荧光实验证实红细胞膜上 存在NOS ，其浓度和活性水平在整个血液贮存的 35 d内保持稳定。L-NAME抑制库存红细胞NO的合成。L-arg(3,30, 300 and 3000 μmol/L) 添加到血液保存液中，显示与NO的合成呈剂量效应关系 (P < 0.01）。L-精氨酸 (3000 μmol/L) 组红细胞 eNOS的 Ser1177 和 Ser113磷酸化水平都显著高于对照组，Thr495 的磷酸化水平低于对照组 (P < 0.05）。添加L-精氨酸的悬浮红细胞显示比对照组高的血管舒张活性(P<0.01)。以上结果显示，L-精氨酸可以诱导Ser1177 和 Ser113的磷酸化，从而增加NO的合成并恢复库存血乏氧性血管舒张的功能。 该项目已经发表核心期刊论文2篇，申报发明专利1项，培养博士和硕士研究生各1名。